Method for Labeling Transcripts in Individual <em>Escherichia coli</em> Cells for Single-molecule Fluorescence <em>In Situ</em> Hybridization Experiments

Rinat Arbel-Goren; Yonatan Shapira; Joel Stavans

doi:10.3791/56600

JoVE Journal
Biology

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Method for Labeling Transcripts in Individual Escherichia coli Cells for Single-molecule Fluorescence In Situ Hybridization Experiments

单分子荧光原位杂交实验中单个大肠埃希菌细胞的转录标记方法

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07:51 min

December 21, 2017

DOI: 10.3791/56600-v

Rinat Arbel-Goren¹, Yonatan Shapira¹, Joel Stavans¹

¹Department of Physics of Complex Systems,Weizmann Institute of Science

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

这篇手稿描述了一种方法, 标记个别信使 RNA (mRNA) 转录与荧光标记的 DNA 探针, 用于分子荧光原位杂交 (smFISH) 实验在大肠杆菌. smFISH 是一种可视化方法, 它允许在固定的单个细胞中同时检测、定位和量化单个 mRNA 分子。

该方案的总体目标是标记大肠杆菌中的单个转录本，用于荧光标记的 DNA 探针，以便在单分子 FiSH 实验中进行可视化。该方法可以帮助回答系统生物学领域的关键问题，例如表征感兴趣领域的转录本细胞间能力。以及细胞壁定位的转录本。

这种技术的主要优点是它提供了有关转录过程统计的大量信息。为了开始该方案，在 LB 培养基中以 260 RPM 和 37 摄氏度的速度在 LB 培养基中培养 E.Coli MG1655 过夜。第二天，在新鲜培养基中将过夜培养物稀释 1 至 100，并在分光光度计中测量其光密度，最高可达 0.2 至 0.4。

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