Name: 基质辅助激光解吸/电离质谱中增强碳水化合物离子信号的高效样品制备方法 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 12 s
Description: 学习基质辅助激光解吸/电离质谱中优化碳水化合物样品制备的方法。通过甲醇再结晶步骤改善晶体形态，可显著增强信号强度，为糖类分析提供可靠的技术方案。

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作者无致谢。

1. 样品板预处理
<ol>
	<li>样品板的清洗
	<ol>
		<li>佩戴腈手套，以避免在清洗过程中污染样品板。</li>
		<li>用100.0 mL洗涤剂溶液（1.0 mg/mL）手工清洗样品板。</li>
		<li>用去离子蒸馏水（DDW）手工清洗样品板。</li>
		<li>用30.0 mL甲醇（MeOH）冲洗样品板表面。</li>
		<li>将样品板放入600 mL烧杯中，并加入DDW直至样品板完全浸没于水中。</li>
		<li>将烧杯置于超声波清洗仪（见材料表）中，对样品板进行超声处理15分钟（200 W，40 kHz）。</li>
		<li>取出样品板，用加压氮气吹去水滴。</li>
		<li>在样品板上沉积0.2 µL甲醇（MeOH），检查甲醇是否扩散至其他点位。 
		注意：若甲醇与其他点位融合，则重复步骤1.1.3–1.1.5；若未融合，则进入下一步。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>干燥室温度的调节
	<ol>
		<li>使用处于稳定条件下的干燥室对液滴进行干燥，具体方法如前所述11,12,13。特别是采用Ou, Y.-M. et al. 201612中步骤2.1–2.5所述的详细流程。简要如下：
		<ol>
			<li>以室温氮气在恒定流速下吹扫干燥室，以维持低相对湿度环境。</li>
			<li>通过干燥室内温控铜块调节，使样品板温度在常规干燥条件（25 °C）或快速干燥条件（50 °C）下保持恒定。</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>基质与分析物溶液的制备
	<ol>
		<li>基质溶液的制备
		<ol>
			<li>将DHB溶于50%乙腈（ACN）:50%去离子蒸馏水（DDW）中，配制成0.1 M的溶液。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>糖类分析物的制备
		<ol>
			<li>将SLeA溶于去离子蒸馏水（DDW）中，配制成10-4 M的溶液。</li>
			<li>将MH溶于去离子蒸馏水（DDW）中，配制成10-4 M的溶液。</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. 样品沉积与再结晶
注意：此处描述的是分析少量且常规样品量的优化步骤。在滴加溶液前，确保样品板温度已稳定在目标温度。如果样品在重结晶过程中扩散至较大区域并覆盖其他样品点，请制备新的样品或重复步骤 1.1。
<ol>
	<li>用于微量样品（0.1 µL）的分析 
	注意：以下步骤旨在最大限度减少样品和时间消耗，适用于样品量有限的实际样品定量分析，或用于快速离子迁移谱（IMS）的定量分析。
	<ol>
		<li>在微量离心管中预先混合 0.25 µL DHB 溶液和 0.25 µL SLeA 或 MH 溶液。</li>
		<li>使用涡旋振荡器对混合溶液涡旋振荡 3 秒。</li>
		<li>在微型离心机中离心 2 秒（2000 × g），使混合溶液沉降至管底。</li>
		<li>使用移液器吸取 0.1 µL 预混溶液，并立即点样至样品靶板上。 
		注意：点样微量样品时，切勿使预混溶液在移液器吸头中停留超过 10 秒。</li>
		<li>等待样品完全干燥。典型的干燥时间见 表 1。</li>
		<li>使用移液器将 0.2 µL 甲醇（MeOH）直接点加至已干燥的样品斑点上，样品将迅速润湿并立即再次干燥。 
		注意：确保点加操作在 3 秒内完成，以避免甲醇发生显著蒸发损失。</li>
		<li>使用显微镜检查样品。若晶体形貌未达到预期效果（参见 图 1 中理想结果示例），请重复步骤 2.1.1–2.1.6，重新制备样品。</li>
		<li>佩戴腈手套，小心地将样品靶板从干燥室中取出。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>用于常规量样品（1 µL）的分析 
	注意：以下步骤旨在最大化碳水化合物样品的均匀性，适用于通常 MALDI 所用样品量的常规及定量分析。重结晶过程可使样品与基质均匀分布于更大区域。
	<ol>
		<li>在微量离心管中预先混合 2.5 µL DHB 溶液和 2.5 µL SLeA 或 MH 溶液。</li>
		<li>使用涡旋振荡器对预混溶液涡旋振荡 5 秒。</li>
		<li>在微型离心机中离心 2 秒（2000 × g），使混合溶液沉降至管底。</li>
		<li>使用移液器吸取 1.0 µL 预混溶液，并立即点样至样品靶板上。 
		注意：DO NOT 在点样完成后再次使用剩余的预混溶液。</li>
		<li>等待样品完全干燥。典型的干燥时间见 Table 1。</li>
		<li>使用移液器将 1.5 µL 甲醇（MeOH）直接点加至已干燥的样品斑点上，样品将迅速润湿并立即再次干燥。 
		注意：当样品靶板温度较高（50 °C）时，重结晶步骤应在 5 秒内完成，以尽量减少移液器吸头中甲醇的蒸发。</li>
		<li>使用显微镜检查样品。若晶体形貌未达到预期效果（参见 图 1 中理想结果示例），请重复步骤 2.2.1–2.2.6，重新制备样品。</li>
		<li>佩戴腈手套，小心地将样品靶板从干燥室中取出。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. 质谱数据采集与分析
注意： 分析使用配备 MALDI 离子源的商用飞行时间质谱仪（材料表）进行。该仪器由特定控制软件（材料表）操作，并预优化了提取延迟时间和激光能量。谱图以线性模式采集，质量范围为 m/z = 0 – 1500。样品靶板电压为 ±25 keV，每张谱图平均采集 10 次激光脉冲。用户应使用兼容软件进行仪器优化和样品分析，并遵循仪器制造商的操作说明。
<ol>
	<li>打开仪器控制软件（参见材料表）。</li>
	<li>将样品板插入质谱仪中。</li>
	<li>在软件中选择预优化的数据采集方法。</li>
	<li>使用成像软件注册整个样品区域以进行成像质谱（IMS）（参见材料表）。 
	注意：若不进行IMS，请跳过此步骤。</li>
	<li>在控制软件的批处理模式下启动数据采集。</li>
	<li>数据采集完成后，使用成像软件绘制离子图像。</li>
	<li>如果数据未伴随离子图像记录，则使用分析软件分析质谱数据（参见材料表）。</li>
</ol>

<ol><li>Holme, D. J., Peck, H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHolme%2C+DJ+%22Analytical+Biochemistry%22">Analytical Biochemistry</a>. , 3rd edn, Addison Wesley Longman Limited. (1998).</li>
<li>Costello, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time%2C+life+...+and+mass+spectrometry+-+New+techniques+to+address+biological+questions%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Time, life ... and mass spectrometry - New techniques to address biological questions.</a> Biophysical Chemistry. 68 (1-3), 173-188 (1997).</li>
<li>Caroff, M., Karibian, D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/14670707">Structure of bacterial lipopolysaccharides.</a> Carbohydrate Research. 338 (23), 2431-2447 (2003).</li>
<li>Marvin, L. F., Roberts, M. A., Fay, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix-assisted+laser+desorption%2Fionization+time-of-flight+mass+spectrometry+in+clinical+chemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Clinica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry in clinical chemistry.</a> Clinica Chimica Acta. 337 (1), 11-21 (2003).</li>
<li>Harvey, D. J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10639030">Matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry of carbohydrates.</a> Mass Spectrometry Reviews. 18 (6), 349-450 (1999).</li>
<li>Ciucanu, I., Kerek, F. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/0008621584852428">A simple and rapid method for the permethylation of carbohydrates.</a> Carbohydrate Research. 131 (2), 209-217 (1984).</li>
<li>Lamari, F. N., Kuhn, R., Karamanos, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivatization+of+carbohydrates+for+chromatographic%2C+electrophoretic+and+mass+spectrometric+structure+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+B%22%5BJournal%5D)">Derivatization of carbohydrates for chromatographic, electrophoretic and mass spectrometric structure analysis.</a> Journal of Chromatography B. 793 (1), 15-36 (2003).</li>
<li>Nishikaze, T., Amano, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reverse+thin+layer+method+for+enhanced+ion+yield+of+oligosaccharides+in+matrix-assisted+laser+desorption%2Fionization%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+Communications+in+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Reverse thin layer method for enhanced ion yield of oligosaccharides in matrix-assisted laser desorption/ionization.</a> Rapid Communications in Mass Spectrometry. 23 (23), 3787-3794 (2009).</li>
<li>Williams, T. I., Saggese, D. A., Wilcox, R. J., Martin, J. D., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+matrix+crystal+structure+on+ion+abundance+of+carbohydrates+by+matrix-assisted+laser+desorption%2Fionization+Fourier+transform+ion+cyclotron+resonance+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+Communications+in+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Effect of matrix crystal structure on ion abundance of carbohydrates by matrix-assisted laser desorption/ionization Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometry.</a> Rapid Communications in Mass Spectrometry. 21 (5), 807-811 (2007).</li>
<li>Nicola, A. J., Gusev, A. I., Proctor, A., Jackson, E. K., Hercules, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+the+fast-evaporation+sample+preparation+method+for+improving+quantification+of+angiotensin+II+by+matrix-assisted+laser+desorption%2Fionization%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+Communications+in+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Application of the fast-evaporation sample preparation method for improving quantification of angiotensin II by matrix-assisted laser desorption/ionization.</a> Rapid Communications in Mass Spectrometry. 9 (12), 1164-1171 (1995).</li>
<li>Lai, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reducing+Spatial+Heterogeneity+of+MALDI+Samples+with+Marangoni+Flows+During+Sample+Preparation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+for+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Reducing Spatial Heterogeneity of MALDI Samples with Marangoni Flows During Sample Preparation.</a> Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 27 (8), 1314-1321 (2016).</li>
<li>Ou, Y. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+Homogeneous+MALDI+Samples+for+Quantitative+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Preparation of Homogeneous MALDI Samples for Quantitative Applications.</a> Journal of Visualized Experiments. (116), e54409(2016).</li>
<li>Lee, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancing+carbohydrate+ion+yield+by+controlling+crystalline+structures+in+matrix-assisted+laser+desorption%2Fionization+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Analytica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Enhancing carbohydrate ion yield by controlling crystalline structures in matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry.</a> Analytica Chimica Acta. , 49-55 (2017).</li>
<li>Allwood, D. A., Perera, I. K., Perkins, J., Dyer, P. E., Oldershaw, G. A. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0169433296005302">Preparation of 'near' homogeneous samples for the analysis of matrix-assisted laser desorption/ionisation processes.</a> Applied Surface Science. 103 (3), 231-244 (1996).</li>
<li>Sadeghi, M., Vertes, A. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0169433297006363">Crystallite size dependence of volatilization in matrix-assisted laser desorption ionization.</a> Applied Surface Science. 127 (Supplement C), 226-234 (1998).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

样品不均一性是基质辅助激光解吸电离质谱（MALDI-MS）中的一个关键问题。干燥液滴法（DD）是最常用的样品制备方法，但所形成的晶体高度不均一。此类样品在质谱信号上表现出较差的点间重复性和样品间重复性。因此，在数据采集过程中，在样品区域中寻找&#34;信号热点&#34;是MALDI实验中的常规操作。这类不均一样品不适用于常规分析中的定量检测。
在本研究中，通过重结晶优化了MALDI样品的形貌。重结晶提高了碳水化合物与基质之间的结合，从而增强了碳水化合物的信号强度和数据稳定性。由于大多数碳水化合物和基质具有亲水性，甲醇（MeOH）能够有效破坏MALDI晶体及其中的碳水化合物。观察发现，甲醇的沉积与快速蒸发可将大的针状DHB晶体重新形成小的片状晶体结构。该过程还减少了样品的分离现象，并增大了表面积。根据IMS数据，重构后的晶体为碳水化合物电离提供了更佳的微环境。值得注意的是，使用干燥室旨在提供一个具有精确控制实验参数的参考条件。对于常规分析，普通质谱用户可在常温环境下遵循相应操作步骤，即可获得类似的效果提升。
通过再结晶实现信号增...

碳水化合物分析是一个重要且具有挑战性的课题。碳水化合物及其衍生物在生物体中发挥着重要作用1,2,3。这些分子结构复杂，且容易分解。由于分离和检测困难，许多碳水化合物难以被明确表征。尽管基质辅助激光解吸/电离（MALDI）质谱（MS）因其高灵敏度和结果易于解读，已被广泛应用于多种生物分子的分析4，但由于碳水化合物分子的电离效率较低，利用MALDI-MS对其进行分析仍面临重大挑战5。化学衍生化是提高碳水化合物电离效率的常用方法6,7，但此类操作耗时且消耗样品量大。此外，衍生化后碳水化合物的电离效率仍低于蛋白质。因此，开发无需复杂操作即可增强MALDI-MS中碳水化合物信号的方法十分必要。
将MALDI-MS应用于定量分析是另一个具有挑战性的课题。MALDI-MS的一个主要问题是，其灵敏度和数据重现性在很大程度上依赖于样品制备方案和实验参数。在许多情况下，由于样品形貌和分析物分布的不均匀性，MALDI-MS的定量分析不可靠。一个众所周知的例子是使用2,5-二羟基苯甲酸（DHB）MALDI基质制备的样品。当DHB在常温环境下缓慢结晶时，分析物掺入基质晶体的程度难以预测，因为所得样品呈现出不规则的形貌。此类样品通常由大针状晶体和细小晶体组成。当使用挥发性溶剂和/或加热样品板制备DHB时，快速干燥过程可形成更均匀的细小晶体，从而获得更可靠的定量结果8,9,10。该技术被称为MALDI样品的&#34;重结晶&#34;。这种改进归因于在快速结晶过程中分析物更好地掺入细小基质晶体中。我们还证明，调节样品制备环境可降低碳水化合物信号的不均一性，从而改善定量结果11,12。这些研究结果表明，样品形貌是决定碳水化合物信号质量的关键因素。为了建立适用于日常分析的通用策略，亟需一种能够提高碳水化合物检测灵敏度的高效样品重构方法。
我们在最近的一篇报告中系统地研究了样品形貌与MALDI-MS中碳水化合物检测灵敏度之间的相关性13。使用多种重要碳水化合物和基质获得的结果表明，通过对干燥后的MALDI样品进行重结晶，可实现最佳的信号增强效果。采用常规干燥液滴法（DD）制备的样品，可通过甲醇（MeOH）快速重结晶来改变其形貌。本文展示了详细的样品制备方案。该方案包括三个主要步骤：样品靶板预处理、样品点样与重结晶，以及质谱分析。所用碳水化合物包括唾液酸化路易斯A抗原（SLeA）和麦芽七糖（MH），DHB作为模型基质。结果表明，重结晶后碳水化合物的信号强度和空间分布显著改善。该方法可适用于其他常用基质的样品，包括2,4,6-三羟基苯乙酮（THAP）和α-氰基-4-羟基肉桂酸。该方法是一种通用性策略，可轻松整合到实验室常规碳水化合物分析流程中。

<table><tbody><tr><td>&lt;强&gt;试剂&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>洗涤剂粉末</td><td>Alconox</td><td>242985</td><td></td></tr><tr><td>甲醇</td><td>默克</td><td>106009</td><td></td></tr><tr><td>乙腈</td><td>默克</td><td>100003</td><td></td></tr><tr><td>2,5-二羟基苯甲酸（DHB）</td><td>Alfa Aesar</td><td>A11459</td><td></td></tr><tr><td>唾液酸化路易斯A（SLe&lt;sup&gt;A&lt;/sup&gt;)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S1782</td><td></td></tr><tr><td>麦芽七糖</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M7753</td><td></td></tr><tr><td>移液器吸头</td><td>Mettler Toledo</td><td>17005091</td><td></td></tr><tr><td>微量离心管</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C</td><td></td></tr><tr><td>&lt;强&gt;仪器设备&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q 水纯化系统</td><td>Millipore</td><td>ZMQS6VFT1</td><td></td></tr><tr><td>无粉丁腈手套</td><td>Microflex</td><td>SU-690</td><td></td></tr><tr><td>600 mL 烧杯</td><td>杜兰</td><td>2110648</td><td></td></tr><tr><td>超声波清洗机</td><td>Delta</td><td>DC300H</td><td></td></tr><tr><td>湿度计</td><td>Wisewind</td><td>5330</td><td></td></tr><tr><td>氮气流量计</td><td>Dwyer</td><td>RMA-6-SSV</td><td></td></tr><tr><td>K型热电偶</td><td>Digitron</td><td>311-1670</td><td></td></tr><tr><td>涡旋混合器</td><td>科学工业公司</td><td>&amp;nbsp;SI-0236</td><td></td></tr><tr><td>小型离心机</td><td>选择生物产品</td><td>Force Mini&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>移液器</td><td>Rainin</td><td>pipet-lite XLS</td><td></td></tr><tr><td>体视显微镜</td><td>Olympus</td><td>SZX16</td><td></td></tr><tr><td>温度可控干燥室</td><td>本实验</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ultraflex II TOF/TOF 质谱仪</td><td>布鲁克道尔顿公司</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MTP 384 目标板 抛光钢 BC</td><td>布鲁克道尔顿公司</td><td>8280781</td><td></td></tr><tr><td>Flexcontrol 版本 3.4</td><td>布鲁克道尔顿公司</td><td></td><td>控制软件</td></tr><tr><td>Fleximaging 版本 2.1</td><td>布鲁克道尔顿公司</td><td></td><td>成像软件</td></tr><tr><td>Flexanalysis 版本 3.4</td><td>布鲁克道尔顿公司</td><td></td><td>分析软件</td></tr></tbody></table>

一种高效的样品制备方法以增强基质辅助激光解吸/电离质谱中的碳水化合物离子信号

An Efficient Sample Preparation Method to Enhance Carbohydrate Ion Signals in Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry

样品制备是碳水化合物质谱（MS）分析中的关键步骤。尽管基质辅助激光解吸/电离（MALDI）质谱是碳水化合物分析的首选方法，但碳水化合物样品的离子信号弱和数据重复性差的问题仍然十分严重。为了实现碳水化合物的定量分析，必须建立一种能够提供高质量数据的有效分析方案。本视频展示了可提高MALDI-MS中碳水化合物信号强度并减少数据变异的样品制备方法。在样品液滴干燥和结晶后，于质谱分析前使用甲醇对晶体形态进行重构。通过MALDI成像质谱（IMS）检测碳水化合物信号的增强效果。实验结果表明，晶体重构可调整晶体结构并重新分布碳水化合物分析物。与传统MALDI-MS中的干燥液滴制备法相比，使用甲醇重构碳水化合物晶体形态可显著改善信号强度、离子图像分布及数据稳定性。由于本视频所展示的方法不涉及样品组成的改变，因此可广泛适用于多种碳水化合物和基质。

采用干燥液滴法（DD）和重结晶法制备的SLeA与DHB混合物的典型扫描电镜（SEM）图像如图1所示。通过DD方法制备的DHB典型形貌表现为样品斑点边缘处存在大尺寸针状晶体，中心区域则为细小的晶态结构，此类针状晶体的典型长度约为100 µm。经甲醇（MeOH）重结晶后，样品表面被更广泛分布且均匀的细小片状晶体覆盖，这些“片状”晶体的长度约为20–50 µm。与传统的DD样品相比，重结晶样品可提供更大的有效表面积。
成像质谱（IMS）结果表明，片状晶体通常会导致更高的碳水化合物信号强度以及更均匀的空间分布。在传统的干滴法（DD）样品中，碳水化合物离子信号主要分布在样品斑点的边缘区域。图2展示了SLeA和MH在有无甲醇重结晶处理下的IMS结果。经过重结晶处理后，SLeA和MH...

本文演示了一种通过在样品制备过程中重构晶体结构来增强MALDI质谱中碳水化合物离子信号的实验方案。

样品制备是碳水化合物质谱分析（MS）中的关键步骤。尽管基质辅助激光解吸/电离（MALDI）……

开发了一种简单的样品制备方法，通过在干燥过程中重塑样品的微观形貌，从而改进传统的基质辅助激光解吸电离质谱技术。该技术的优势在于，采用此优化方法制备的碳水化合物样品，其信号强度可得到显著增强。通常，初次接触该方法的研究人员可能会遇到困难，因为甲醇减压步骤非常关键，且必须一次性完成。任何犹豫都会降低数据质量。开始时，佩戴腈手套，用100毫升洗涤剂溶液手动清洗样品板，然后用去离子蒸馏水（DD水）手动冲洗该板。然后，用30毫升甲醇冲洗其表面。将样品板插入600毫升烧杯中，并加入去离子水直至完全浸没样品板。随后将烧杯放入超声波清洗仪中，对样品板超声处理15分钟。将样品板从烧杯中取出，使用加压氮气吹去水滴。然后在样品板上滴加 0.2 微升甲醇，检查其是否扩散至其他点样位置。若发生扩散，需重复上述清洗、超声处理和氮气吹扫步骤。按照文本方案准备干燥室后，在微量离心管中预先混合 0.25 微升 2,5-二羟基苯甲酸溶液和 0.25 微升唾液酸-Lewis A 或麦芽七糖溶液。然后将离心管涡旋振荡 3 秒。在微型离心机中以 2000 × g 离心 2 秒，使混合溶液沉降至管底。然后立即用移液器将0.1微升预混溶液转移至样品板上。待样品干燥后，在避免蒸发的前提下迅速操作，直接向样品点加入0.2微升甲醇。样品将重新溶解，随后立即干燥。甲醇沉积步骤是决定数据质量和可重复性的最关键步骤，也是最难的操作步骤。为确保最佳效果，建议用户在三到五秒内完成沉积过程，以避免甲醇发生显著的蒸发损失。佩戴腈类手套，并小心地将样品板从干燥室中取出。然后，在显微镜下观察样品。如果晶体形态不符合预期，需重新混合样品并再次点样至样品板上。为了确保样品晶体在重结晶后具有最佳形态，务必使用显微镜进行检查。仅凭肉眼难以准确判断晶体形态的质量。为分析一微升样品，需在微量离心管中预先混合 2.5 微升 2,5-二羟基苯甲酸溶液与 2.5 微升唾液酸化路易斯A抗原（Sialyl-Lewis A）或麦芽七糖（maltoheptaose）溶液。将预混溶液涡旋振荡五秒钟。将混合溶液在2000 × g条件下离心两秒钟，然后立即用移液器吸取1 µL预混溶液至样品板上。待样品干燥后，直接向干燥的样品斑点加入1.5 µL甲醇。样品将重新溶解并迅速再次干燥。小心地从干燥室中取出样品。在显微镜下检查样品。如果晶体形貌不符合预期，请按照刚刚演示的步骤重复溶液制备。进行质谱分析时，打开质谱仪控制软件，将样品板插入仪器中。在软件中选择预优化的数据采集方法，然后使用成像软件对整个样品区域进行配准，以进行成像质谱分析。在控制软件的批量模式下启动数据采集。数据采集完成后，使用成像软件根据文本方案绘制离子图像并分析数据。此处展示了采用干燥液滴法和重结晶法制备的唾液酸化路易斯A抗原与2,5-二羟基苯甲酸混合物的代表性扫描电镜图像。典型的2,5-二羟基苯甲酸结晶形态表现为：样品斑点边缘为较大的针状晶体，中心区域则为细小的结晶结构。经甲醇重结晶后，样品表面被细小的片状晶体均匀覆盖，面积更大。该图展示了有无甲醇重结晶处理时Sialyl-Lewis A和麦芽庚糖的成像质谱结果。重结晶后，Sialyl-Lewis A和麦芽庚糖信号的分布与样品斑点的明场图像高度吻合。与传统的干滴法样品相比，重结晶碳水化合物样品的信号强度也得到增强。该图比较了重结晶样品与干滴法样品在钠加合或正离子模式以及去质子化或负离子模式下碳水化合物的信号强度。平均而言，Sialyl-Lewis A 和麦芽七糖样品的重结晶使钠加合信号分别增强了 3.9 倍和 3.3 倍。去质子化的唾液酸-Lewis A 离子信号在重结晶后增强了4.7倍。一旦掌握，若操作得当，使用该技术可在10分钟内完成样品制备。在进行此操作时，必须立即将甲醇液滴准确地沉积在样品点上。观看本视频后，您应能充分理解如何有效控制多个样品的晶体形态，以获得最佳离子信号用于常规分析。

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基质辅助激光解吸/电离质谱中增强碳水化合物离子信号的高效样品制备方法

本视频演示了为通过基质辅助激光解吸电离质谱法（MALDI-MS）分析肽和蛋白质而制备超薄基质/分析物层的方法。...

MALDI 样品制备：超薄层法

精确质量测定是蛋白质研究过程中的重要步骤。基质辅助激光解吸/电离（MALDI）质谱（MS）可用于此类测定，其主要优势在于对盐类、去污剂和污染物具有良好的耐受性。本文展示了一种利用MALDI-MS分析分子量大于100...

基质辅助激光解吸/电离飞行时间（MALDI-TOF）质谱法分析完整蛋白质（分子量大于100 kDa）

此前已有报道称，二蒽醇（DT；1,8-二羟基-9,10-二氢蒽-9-酮）可作为小分子组织成像的基质辅助激光解吸电离（MALDI）基质；本文提供了在超高清分辨率四极杆-傅里叶变换离子回旋共振（quadrupole-FTICR）仪器上，采用正离子模式MALDI-MS技术，利用DT对组织切片表面内源性脂质进行MALDI成像的实验方案 。...

使用二蒽醇作为基质在傅里叶变换离子回旋共振质谱仪上进行基质辅助激光解吸/电离成像

本文演示了一种通过在样品干燥过程中调控基底温度来降低MALDI质谱中离子信号空间异质性的实验方案。...

用于定量分析的均一化MALDI样品制备

本方案描述了一种基于升华法的可重复且可靠的制备福尔马林固定组织的方法，该组织用于成像质谱分析。...

福尔马林固定样本用于基于肽的基质辅助激光解吸/电离质谱成像工作流程的最佳制备方法

本文描述了一种用于合成聚合物的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF...

通过基质辅助激光解吸电离飞行时间（MALDI-TOF）质谱法表征合成聚合物

离子淌度质谱法（IMS）是质谱技术在生物分子表征方面的一种有益补充，尤其因为它对同分异构现象具有敏感性。本方案描述了一种串联离子淌度（IMS/IMS）实验，可实现对特定分子的选择性分离，并生成其碎片的淌度谱图。...

使用环形离子淌度质谱仪进行串联离子淌度实验

一种用于分析基于琼脂的细菌大菌落的新型样品制备方法 通过...

微生物合作行为的研究 通过 感染过程中在琼脂和组织内生长的细菌菌落的成像质谱分析

本方案旨在详细阐述如何制备低含水量硬质种子样品切片，用于基质辅助激光解吸电离成像质谱（MALDI-IMS）分析，在保持分析物原始分布和丰度的同时，提供高质量的信号和空间分辨率。...

硬质油棕种子用于基质辅助激光解吸/电离成像质谱分析的制备

本方案提供了详细的说明和示例，介绍如何利用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱技术，对具有不同分散性和端基的合成聚合物进行样品制备、数据采集和数据分析。...

用于表征不同分散性和端基的合成聚合物的MALDI-ToF MS方法

学习基质辅助激光解吸/电离质谱中优化碳水化合物样品制备的方法。通过甲醇再结晶步骤改善晶体形态，可显著增强信号强度，为糖类分析提供可靠的技术方案。

一种高效的样品制备方法以增强基质辅助激光解吸/电离质谱中的碳水化合物离子信号

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