预测使用局部循环单核祖细胞在血管成形术治疗的危肢缺血患者截肢

尽管血管成形术可以改善严重肢体缺血的血流，但一些患者仍会发展为截肢。与基于传统危险因素和内在血管特征的预后相比，局部 MPC 的数量可以更能预测内皮功能障碍和肢体截肢的临床结果。局部 MPC 的数量代表了血管事件（例如缺血性心脏病和下肢缺血）预后的有前途的指标，可能在风险分层和预防实施中应用。

演示这些程序的将是 Eduardo Vera-Gomez、Alejandro Hernandez-Patricio、Carolina Aranda-Rodriguez、Juan Ariel Gutierrez-Buendia、Atzin Sua Ruiz-Hernandez、Mario Antonio Tellez-Gonzalez 和 Gabrielle Alexandra Dominguez-Perez。来自实验代谢和组织再生实验室的博士也将是 Gabrielle Hernandez-De Rubin 和 Oscar Antonio Loman-Zuniga。这些来自血管外科。

要确定血管成形术前后的 FMD，请使用血管线性换能器测量患者肱动脉的直径。接下来，将血压计的袖带放在前臂测量部位上方，并在放气前将袖带充气至收缩压以上 50 毫米汞柱 5 分钟。在放气后 60 秒内，再次测量肱动脉直径，并使用公式估计 FMD。

为了评估肢体缺血的临床严重程度，根据卢瑟福分类，将一根 18 号针头放入所选腹股沟部位的血管中，并在针头上放置一个导引器。将一根柔性导丝推进到导引器中，并用一个 6 法式导引器替换导引器。使用透视引导，注射造影剂以确定动脉轨迹和阻塞的血管部位。

将两根 0.014 法式导航导丝和两根 0.014 法式支撑导丝引入血管，并将导丝推进到堵塞部位。接下来，引入一根 5 French 导管，然后引入一根 3 French 导管，并从最靠近血管阻塞的部位采集 10 毫升血液。将样品放在冰上并再次推进导丝。

导丝就位后，引入血管成形术球囊导管，其中包含位于导管末端的充气球囊，并将血管成形术球囊导管推进到病变部位。对位于血管壁的阻塞斑块给球囊充气，并验证血流的恢复。进行血管成形术后 30 分钟，将导管推进到最靠近血管阻滞的部位并收集 10 毫升血液。

然后，移除所有导丝并提供适当的术后护理。血管成形术后两周，根据卢瑟福分类评估肢体缺血的临床严重程度、消退的静息痛、下缺血和足部功能保留，并确定因不良结果而需要大截肢的病例。在采集后 1 小时内，将收集的每 6 毫升血液样本转移到新的 15 毫升试管中，并在 PBS 中以 1：1 的比例稀释样本。

向三个试管中的每一个中加入 2 毫升密度梯度培养基，并向每个试管中加入三个等体积的稀释血液等分试样，直至不超过四分之三满。通过密度梯度离心分离血细胞，并使用移液器收集所得层界面的细胞。将每个样品中的细胞拉入一个 15 mL 试管中，每个样品洗涤 6 次，每次洗涤 2 mL PBS。

最后一次洗涤后，将含有沉淀的 MPC 重悬于每个样品 1 毫升 PBS 中进行计数，并向每管 6 个细胞中加入 10 乘以 5 毫升流式细胞术管，至每个样品 5 毫升流式细胞术管的适当数量。通过离心沉淀细胞，将每个细胞样品重悬于 100 μL 目标抗体混合物中 10 秒，然后在 4 摄氏度下避光孵育细胞 20 分钟。在孵育结束时，使用同种型匹配的对照抗体设置适当的前向和侧向散射门进行分析，并使用含有大量 CD45 和 CD34 阳性细胞的试管对 NPC 进行门控。

要选择双阳性免疫表型，请创建新图并设门识别 KDR、CD133 和 CD184 阳性、CD34 阳性、CD45 阳性细胞，然后设门以识别主要的 MPC 亚群。然后可以将 MPC 的数量与基线 FMD 值、血管成形术后 FMD 的 delta 以及需要下肢大截肢的患者比例相关联。在这项代表性分析中，下肢血管成形术后 30 天，CD45 阳性、CD34 阳性、KDR 阳性 MPC 的基线数与 FMD 呈负相关。

而血管成形术后 CD45 阳性、CD34 阳性、CD133 阳性、CD184 阳性 MPC 的变化与 FMD 改善显著相关。在发展为截肢的患者中，还观察到 MPC CD45 阳性、CD34 阳性、KDR 阳性亚群的基线数量增加，以及血管成形术后 MPC CD45 阳性、CD34 阳性、CD133 阳性、CD184 阳性细胞的减少，在血管入路期间，一定要从最靠近血管阻塞的部位采集血液。