一种胰腺癌的原位切除小鼠模型

本方案描述了一种稳定且可重复的小鼠胰腺癌手术切除模型，可用于辅助治疗和新辅助治疗的测试。该技术结合了共感染原位模型，能够有效模拟人类胰腺癌，并采用了安全有效的胰腺切除技术。尽管本方案描述的是免疫缺陷模型，但也可采用另一种免疫健全模型，即将KPC肿瘤细胞植入C57黑六小鼠体内进行实验。

这种替代方法可用于测试免疫疗法。首先，将麻醉后的小鼠仰卧置于无菌区域，依次使用聚维酮碘和70%乙醇进行皮肤消毒。在腹部左前象限做一纵向切口以分离皮肤，并用镊子剪开肌层。

将含有细胞悬液的注射器安装到注射装置上后，将荷包缝线棉签置于腹部切口上方，并通过棉签的开口将脾脏和胰腺尾部外置。轻轻收紧荷包缝线棉签，暴露胰腺尾部以进行注射，确保纱布与胰腺周围充分接触，但不对其造成压迫。用镊子夹住胰腺尾部，并轻轻施加侧向张力。

用针头穿刺胰腺，针尖斜面向上，推进针头时将针尖略微向上抬起，直至针头斜面完全进入腹膜腔。以缓慢且可控的方式将细胞悬液注射至胰腺实质中。注射后，将针头在原位停留数秒钟，然后撤出，以尽量减少渗漏。

使用浸有聚维酮碘的棉签轻轻蘸拭部位，以吸收意外泄漏的细胞悬液。将脾脏和胰腺复位至其解剖学原位，并用5-0聚乙醇酸缝线关闭腹壁。用皮夹关闭皮肤。

在腹部左上象限的皮肤上做一个纵向切口，最好通过先前的切口位置。钝性分离皮肤与下方的肌肉性腹壁，并放置一个全自动自持牵开器以保持切口开放。

在止血钳之间切开肌层，切口位于先前手术缝合线的一侧，然后延伸切口以切除整个先前的缝合线。通过向头侧牵拉，将脾脏和胰腺显露于体外。

在此情况下，发现部分粘连附着于肿瘤的下表面，需用电灼法予以分离。结肠可能通过菲薄的粘连附着于胰腺的尾部。

若发现此情况，直接钝性分离结肠。通过在胰体部脾脏血管后方小心地插入一对镊子，暴露需结扎的胰腺段。使用钛夹在肿瘤近端结扎胰腺，然后用电凝法在钛夹远端横断胰腺。

或者，在横断前使用5-0聚乙醇酸缝线将胰腺连续结扎，以控制胰腺残端。小心地向尾侧牵拉胰腺，并在脾脏颅极与胃之间电凝胃脾血管。注意这些血管较细，若发生撕脱或电凝不充分，可能容易出血。

此类血管可能回缩至腹腔内并引起出血，且出血可能难以控制。切除标本后，检查手术部位以确认止血完全。使用5-0聚乙醇酸缝线连续缝合腹壁，并用钉皮钉闭合皮肤。

在连续接受植入手术的59只小鼠中，有8只出现了明显的渗漏。经过三周的肿瘤生长后，术前活体成像可排除患有明显转移性疾病的动物，使其不接受手术切除。最终共有45只小鼠接受了胰腺切除术。

该操作在100%的小鼠中成功实施。其中，43只小鼠获得了大于五毫米的肉眼可见的胰腺近端切缘。在切除时，45只小鼠中有9只发现局部转移。

除了缝合线处发生转移外，3只小鼠的胃大弯上观察到孤立性转移结节，1只小鼠的肝脏上观察到包膜下结节。6只小鼠出现局部胰腺外侵犯，其中5只小鼠直接侵犯至缝合线，1只小鼠侵犯至肝脏。术后1周，32只小鼠的最大辐射率比值低于10，提示残留病灶极少或无残留病灶。

从麻醉诱导至关闭切口的平均手术时间为22分钟。切除手术中的关键步骤是识别位于脾血管和胰腺背侧的无血管胚胎平面。沿此平面进行分离可游离出一段胰腺，以便后续结扎。

切除术后，可对小鼠进行辅助治疗。随后可根据当地动物伦理规范，结合活体成像、尸检结果和动物生存情况来评估疾病进展。