带稳定针的小鼠股骨横断

该协议描述了一种在成年小鼠身上进行和研究股骨骨折的可靠技术。这种技术简单，快速，并且需要执行的工具最少。它允许表征骨折愈合的不同阶段。

个体最初可能难以正确对齐骨折末端并在小鼠之间产生一致的骨折。密切关注骨折部位，插入针和闭合伤口将提高该手术的成功率。首先，通过皮下注射每公斤丁丙诺啡0.05毫克来制备动物。

使用电动修剪器在两条大腿上剃除两乘两厘米的正方形，对应于股骨的位置。使用碘对剃须区域进行灭菌，并用70%乙醇溶液冲洗。做一个五毫米的切口，露出下面的筋膜。

通过切割筋膜暴露覆盖股骨的肌肉。在不损伤组织的情况下将肌肉与股骨分开，然后将肌肉与骨骼分离并固定股骨以进行切割。在股骨轴中间进行横向切口。

将导针插入骨髓腔的远端部分，并将线推过膝关节。然后，取出导针并从近端执行类似的程序。将针头留在近端，其尖端出现在皮肤上方。

在导针的尖端内插入一个稳定销，推动它，使其在导针被拉出时进入近端腔，然后丢弃导针。将远端与近端对齐，使螺纹在离开膝关节时穿过远端骨髓腔。使用手术钳拉动针尖，使近端和远端部分拉在一起。

然后将手术针的末端朝向骨折部位折叠，以重新对齐骨折末端。使用线切割器从针的底部取出塑料。扭转针脚的末端，以避免任何内部组织损伤。

最后，将肌肉置换到股骨上，并用夹子捏合皮肤来关闭伤口开口。执行类似的程序，另一条腿上没有股骨骨折并闭合伤口。手术成功后，荧光成像揭示了在股骨骨折修复过程中发现的各种Messent-Kinal祖细胞，例如Prx1阳性骨膜细胞。

骨折股骨的阿尔西安蓝染色揭示了软愈伤组织的形成。此外，还确定了愈伤组织或软骨形成的百分比。在断裂后约28 d采用Micro-CT，探测到矿化过程以及愈伤组织间隙和断裂间隙。

还观察到，如果骨折末端未正确对齐或未用销钉固定，则裂缝末端的所有或一侧均没有无情形成。当尝试这个程序时，请记住小心地对齐断股骨的两端，并用针固定它们，以确保适当的愈合。手术后，可以收集股骨进行成像和分子分析。