Summary
We presenteren details over laboratoriumprocedures voor geneesmiddelvrije in-vitroactivatie (IVA) van ovariële follikels voor patiënten met ernstige ovariële disfunctie. Deze methode zou het aantal opvraagbare oöcyten per ovariële hyperstimulatie kunnen verhogen en het vruchtbaarheidsbehoud voor die patiënten ten goede komen.
Abstract
De ovariële functie neemt geleidelijk af tijdens het ouder worden en bij sommige pathofysiologische aandoeningen, waaronder karyotypeafwijkingen, auto-immuunziekten, chemo- en bestralingstherapieën, evenals eierstokoperaties. Bij ongehuwde vrouwen met ernstige ovariële disfunctie is vruchtbaarheidsbehoud belangrijk voor toekomstige zwangerschappen. Hoewel oöcyt cryopreservatie een gevestigde methode is voor vruchtbaarheidsbehoud, konden deze patiënten slechts een beperkt aantal oöcyten behouden, zelfs na ovariële hyperstimulatie, wat leidde tot herhaalde stimulaties om voldoende oöcyten te garanderen om toekomstige zwangerschap te garanderen. Om dit probleem op te lossen, hebben we onlangs een medicijnvrije in vitro activeringsprocedure (IVA) ontwikkeld, die ons in staat stelt om vroege stadia van eierstokfollikels te stimuleren om zich te ontwikkelen tot de preantrale follikelfase. Deze preantrale follikels kunnen reageren op het unieke protocol van gonadotropinestimulatie, wat resulteert in een verhoogd aantal opgehaalde oöcyten per ovariële stimulatie voor cryopreservatie. De geneesmiddelvrije IVA bestond uit de chirurgische aanpak en ovariële stimulatie. We verwijderden een deel van de cortex uit een of beide eierstokken van patiënten onder laparoscopische chirurgie. De ovariële corticale weefsels werden in kleine blokjes gesneden om de Hippo-signaleringsroute te verstoren en de ontwikkeling van follikels in een vroeg stadium te stimuleren. Deze kubussen werden orthotropisch geënt in resterende eierstokken en onder de serosa van beide eileiders. We hebben de chirurgische procedure van de geneesmiddelvrije IVA en het protocol van daaropvolgende eierstokstimulatie al gepubliceerd, maar hierin presenteren we de details van laboratoriummethoden die nodig zijn voor medicijnvrije IVA.
Introduction
De ovariële functie neemt geleidelijk af tijdens het ouder worden en sommige pathofysiologische aandoeningen, waaronder karyotypeafwijkingen, auto-immuunziekten, chemo- en bestralingstherapieën en eierstokoperaties. Het behoud van de vruchtbaarheid is één van de beste opties voor ongehuwde vrouwen met ernstige ovariële disfunctie om hun potentieel voor toekomstige zwangerschap te bewaren. Voor vruchtbaarheidsbehoud, momenteel zijn twee methodes meestal beschikbaar op het onco-vruchtbaarheidsveld. Oöcyt cryopreservatie is een gevestigde procedure voor vruchtbaarheidsbehoud en vele succesvolle gevallen zijn gemeld1,2. Aan de andere kant werd cryopreservatie van eierstokweefsel ook vastgesteld voor vruchtbaarheidsbehoud bij kankerpatiënten, maar het is nog steeds een experimentele strategie3,4. In beide methoden zijn meerdere aantallen volwassen oöcyten nodig om zwangerschap te laten plaatsvinden. Over het algemeen vertoonden patiënten met voortijdige ovariële insufficiëntie (POI), die vóór de leeftijd van 40 jaar amenorroe worden, en vrouwen van middelbare leeftijd met een lage ovariële reserve een slechte ovariële respons (POR) op ovariële stimulatie voor het opleveren van volwassen oöcyten5,6,7. Bovendien vertoonden jonge patiënten met een laag aantal antrale follikels ook POR aan de ovariële stimulatie7. Deze patiënten hebben een zeer beperkt aantal opvraagbare oöcyten, zelfs na de juiste ovariële hyperstimulatie, waardoor meerdere dure procedures nodig zijn om een voldoende aantal oöcyten voor de zwangerschap te garanderen.
Oöcytdonatie gevolgd door in-vitrofertilisatie (IVF) met sperma- en embryotransfer (ET) van de man is de enige optie voor deze POI- en POR-patiënten die moeite hebben met het verkrijgen van hun eigen oöcyten8,9,10. Oöcytdonatie wordt echter gecompliceerd door ethische kwesties en auto-immuun - en zwangerschapscomplicaties11,12,13,14. Om deze problemen op te lossen, is de totstandbrenging van onvruchtbaarheidsbehandeling gebruikend de eigen oöcyten van patiënten gewenst. Voor POI-patiënten hebben we de in vitro activatie (IVA) benadering ontwikkeld om succesvolle follikelgroei en de generatie van volwassen oöcyten mogelijk te maken, waardoor een aantal zwangerschappen en bevallingen worden geleid15. In IVA hebben we eierstokschors gefragmenteerd na verwijdering van eierstokken onder laparoscopische chirurgie en ze twee dagen gekweekt om follikels te activeren door Akt-stimulerende geneesmiddelen en vervolgens heterotopische enting uit te voeren in kunstmatige zakjes gemaakt onder de serosa van eileiders onder tweede laparoscopische chirurgie15. Deze procedure bevorderde de groei van primordiale, primaire en secundaire follikels na fragmentatie van de eierstokschors om hippo-signaalverstoring16te bevorderen, gevolgd door twee dagen cultuur met Akt-signaleringstimulatoren17.
In tegenstelling tot ernstige POI-gevallen hebben POR-patiënten met een verminderde ovariële reserve meerdere secundaire follikels. Omdat Hippo signalering verstoring alleen effectief is in het bevorderen van secundaire follikelgroei16, hebben we onlangs succesvolle zwangerschappen en bevallingen aangetoond voor POR-patiënten die de medicijnvrije IVA-procedure gebruiken met corticale fragmentatie en orthotopische enting zonder behandeling van de Akt stimulerende geneesmiddelen. Geneesmiddelvrije IVA stimuleert het vroege stadium van eierstokfollikels om zich na slechts één operatie te ontwikkelen tot de preantrale follikelfase en verhoogde het aantal opgehaalde oöcyten voor IVF-embryotransfer15,18. De geneesmiddelvrije IVA-aanpak heeft verschillende voordelen ten opzichte van onze oorspronkelijke IVA door 1) het vermijden van potentieel follikelverlies tijdens de cultuur, 2) het minimaliseren van invasiviteit en kosten van de tweede operatie, 3) waarbij alleen korte termijn bedrust na de operatie betrokken is en 4) potentieel van spontane zwangerschap als gevolg van orthotopische enting. We hebben onlangs een videoartikel gepubliceerd met de chirurgische procedures van medicijnvrije IVA19 en gedetailleerde protocollen voor eierstokstimulatie na de operatie20. Hier presenteren we details over laboratoriummethoden die nodig zijn voor medicijnvrije IVA.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Schriftelijke geïnformeerde toestemming werd verkregen van elke POR-patiënt met afnemende ovariële reserve die zich inschreef voor de geneesmiddelvrije IVA-behandeling. Deze studie werd goedgekeurd door de Ethische Commissie van de Internationale Universiteit voor Gezondheid en Welzijn (Nr. 17-S-21). Klinische proef werd geregistreerd onder nummer UMIN000034464 en uitgevoerd in overeenstemming met de ethische code van de World Medical Association (Verklaring van Helsinki).
1. Ovariële cortexextractie
- Verwijder een deel van de ovariële cortex (10 x 10 mm, 2-3 mm dikte) van een of beide eierstokken onder algemene anesthesie door middel van laparoscopische chirurgie zoals eerder beschreven19,20.
- Plaats de verzamelde ovariële cortexen in een steriele container met 10 ml gemodificeerde HTF (mHTF) bij 37 °C.
2. Fragmentatie van de eierstokschors
OPMERKING: Warm mHTF op tot 37 °C voordat de eierstokschors wordt ontleed. Houd steriele omstandigheden gedurende de hele procedure. Alle hulpmiddelen voor deze procedure worden vermeld in de tabel met materialen.
- Plaats de verzamelde ovariële cortexen in een plastic schaal met 5-10 ml mHTF bij 37 °C en plaats ze op de warmteplaat om het weefsel op 37 °C te houden (figuur 2A).
- Maak een foto van elke cortex met behulp van een digitale camera met de naam van de patiënt voordat u de volgende procedure start om achtergrondgegevens van de patiënt te koppelen.
- Plaats een individuele cortex op een steriel gaas bevochtigd met mHTF (Figuur 2B).
OPMERKING: Breng extra mHTF aan met een wegwerppipet op het gaas om te voorkomen dat het oppervlak van de cortex tijdens deze procedure uitdroogt. - Verwijder restpapier van medulla waar het er roze uitziet met een microschaar, zodat de dikte van het weefsel 1-2 mm bereikt (figuur 2C en D).
OPMERKING: Om het verlies van follikels in een vroeg stadium te voorkomen, moet u de corticale strips met een dikte van minder dan 1 mm niet voorbereiden, omdat de follikels in een vroeg stadium zich binnen 1-2 mm van het oppervlak van de ovariële cortexbevinden 21. - Ontleed een weefselstuk van 1 mm x 1 mm x 5 mm van elke eierstokschorsstrook met behulp van een fijne scalpel en onderwerp het aan histologische analyse om de aanwezigheid van resterende follikels te bepalen zoals eerder beschreven18 (Figuur 2E).
OPMERKING: De ontlede weefsels voor histologie worden ondergedompeld in mHTF en blijven tot de fixatie op 4 °C(figuur 2F,zie stap 4). - Snijd de cortex in stroken van 1 mm x 1 mm x 10 mm met behulp van een fijne scalpel (figuur 2G).
OPMERKING: Het is gemakkelijker te snijden door op de scalpel te drukken dan door eraan te trekken. - Snijd deze weefselstrips in kleine blokjes van 1 mm x 1 mm x 1 mm (afbeelding 2H).
OPMERKING: Om veranderingen van de osmotische druk in het medium te voorkomen, voegt u mHTF met mate toe voordat het weefsel automatisch wordt getransgrafeerd.
3. Auto-enting van eierstok corticale fragmenten
- Open de verpakking van de IVA canule en leg deze op een steriel doekje.
- Spoel de binnenkant van de IVA canule af met mHTF door mHTF meerdere keren aan te werken en te ontladen.
- Aspireer 100-200 μL mHTF om de punt van de IVA-canule te vullen om te voorkomen dat de corticale kubussen uitdrogen tijdens het laden (Figuur 3A).
- Plaats de corticale blokjes in de punt van de IVA canule met een fijn pincet (Afbeelding 3B-E).
OPMERKING: Het aantal corticale kubussen voor het laden is afhankelijk van de entplaats. Over het algemeen kunnen 20-30 kubussen worden getransplanteerd in een orthotrope resterende eierstok, terwijl 10-15 kubussen kunnen worden getransplanteerd in een zakje onder de serosa van de eileider. - Houd na het laden van de corticale kubussen de punt van de canule met de corticale kubussen bij de vingers totdat u de IVA-canule naar een chirurg brengt. Dit voorkomt dat de kubustemperatuur daalt.
OPMERKING: De details van autografting procedure onder laparoscopische chirurgie zijn eerder gemeld19. Voor het enten van eierstok corticale kubussen is een canulevormig apparaat (IVA canule) ontwikkeld door onze medewerker, de Kitazato Corporation.
4. Histologische analyse van de ovariële cortex
OPMERKING: Om het aantal resterende follikels te tellen, voert u een histologische analyse uit zoals eerder beschreven15.
- Markeer het oppervlak van de corticale strip met een weefselmarkeringskleurstof vóór monsterfixatie. Dit geeft de kant van de cortex aan in de strip voor histologie.
- Bevestig de tissuestrips 's nachts bij 4 °C met de oplossing van Bouin.
OPMERKING: Om atretische follikels te detecteren, raden we niet aan paraformaldehyde te gebruiken voor bevestiging om krimp van oöcytcytcytplasma te voorkomen. - Dehydrateer en integreer de weefselstrips in paraffine.
- Sectie het paraffineblok met het weefselmonster serieel door.
- Bevlek elke sectie met hematoxyline en eosine om de follikels te visualiseren.
- Tel de follikels zoals eerder beschreven17.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
In de eerste publicatie van de IVA-benadering15hebben we de eierstokschorsblokjes één voor één getransplanteerd naar de entplaatsen onder laparoscopische chirurgie (figuur 1A). Omdat 100-150 eierstokblokjes werden gebruikt, duurde het 3-4 uur voor weefseltransplantatie onder laparoscopische chirurgie. Ook gingen sommige eierstokblokjes verloren voordat ze werden geënt. Omdat de IVA canule 20-30 kubussen in één keer naar een entplaats kon overbrengen(figuur 1B),konden we de werkingstijd verkorten tot 1-2 uur. Bovendien kan de IVA-canule het verlies van eierstokschorsblokjes tijdens de operatie elimineren.
Figuur 1: De effectiviteit van de IVA canule. (A) Eerdere methode met het transplantatie van eierstok corticale kubussen één voor één met behulp van een tang. (B) De huidige methode met het in één keer verplanten van 20-30 blokjes met behulp van de IVA canule. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.
Figuur 2: Eierstokweefseldissectie voor geneesmiddelvrije IVA. (A) Een stuk ovariële cortex wordt geplaatst in een plastic schaal met mHTF bij 37 °C. (B) Om resterende medullaweefsels te verwijderen, wordt de ovariële cortex op een bevochtigd gaas geplaatst. (C) Medulla weefsel wordt verwijderd met behulp van een fijne microschaar. (D) De dikte van de te bereiden cortex ligt tussen 1 en 2 mm. (E) Na verwijdering van medullaweefsel wordt een weefselstuk van 1 mm x 1 mm x 5 mm van elke ovariële corticale strip ontleed voor histologische analyse. (F) Het ontlede weefsel wordt opgeslagen in een buis van 1,5 ml met mHTF bij 4 °C tot de bevestiging voor histologie. (G en H) De ovariële cortex wordt in stroken van 1 mm x 1 mm x 10 mm gesneden en vervolgens verder in kleine blokjes van 1 mm x 1 mm x 1 mm gesneden met behulp van een fijne scalpel. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.
Figuur 3: Auto-enting van eierstok corticale fragmenten. (A) Voor het laden van kubussen wordt 100-200 μL mHTF aangezogen om de punt van de IVA-canule te vullen om te voorkomen dat de corticale kubussen uitdrogen tijdens het laden (B-E) Het laden van ovariële corticale kubussen in de punt van de IVA-canule. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
In dit manuscript toonden we een gedetailleerd laboratoriumprotocol voor drugsvrije IVA. De drug-vrije IVA is een nieuwe benadering van onvruchtbaarheidsbehandeling voor POR-patiënt met afnemende ovariële reserve om secundaire follikelsgroei te bevorderen, resulterend in het opleveren van meer rijpe oöcyten na ovariële stimulatie en toenemend in succesvolle zwangerschap20. Bij 15 POR-patiënten met een afnemende ovariële reserve bereikte deze aanpak één spontane zwangerschap, in vitro bevruchting-embryotransfer maakte vier levende geboorten mogelijk, samen met één lopende zwangerschap19.
Voor de voorbereiding van het enten van de eierstokschors werd medullaweefsel verwijderd met een microschaar met een dikte van 1-2 mm. Eerder toonden we aan dat primordiale, primaire en meerderheid van secundaire follikels zich binnen 1 mm dikte van het oppervlak van de eierstokschors bevonden bij patiënten met normale ovariële reserve21. Bij POI-patiënten ontdekten we dat secundaire follikels zich dieper dan 1 mm bevonden, maar binnen 2 mm van het oppervlak van de eierstokschors21. Van antrale follikels is bekend dat ze zich in medullaweefsels21bevinden, maar er is geen follikel gevonden in medullaweefsels bij POI-patiënten21. Hoewel POR-patiënten met een afnemende ovariële reserve antrale follikels in medullaweefsel kunnen hebben, zijn antrale follikels moeilijk te overleven na enten vanwege gebrek aan bloedvatcommunicatie22. Daarom hebben we de dikte van de eierstokschors vastgesteld op 1-2 mm en de kritieke stap binnen het protocol is niet dat de corticale strips < 1-2 mm worden om verlies van kostbare resterende follikels te voorkomen. Tijdens de bereiding van corticale strips en kubussen gebruikten we mHTF, maar men kan een vergelijkbaar medium gebruiken dat 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonzuur (HEPES) buffer omvat.
In deze procedure transplanteerden we de eierstokschors nadat we deze in 1 mm3 kubussen15,20haddengesneden. Vanwege de moeilijkheid bij het hanteren van dergelijke kleine fragmenten voor enting, duurde het een voor een enten van eierstokblokjes onder de laparoscopische operatie 3-4 uur, waarbij sommige kubussen af en toe verloren gingen tijdens de operatie. Na de ontwikkeling van de IVA-canule konden we de operatietijd verkorten tot 1-2 uur, wat resulteerde in het minimaliseren van de invasiviteit van de operatie, zodat de medicijnvrije IVA een enkele dagoperatie werd. Bovendien kunnen we het verlies van eierstok corticale kubussen tijdens de operatie elimineren. Vanwege het beperkte aantal follikels in de ovariële cortex bij POR-patiënten met een afnemende ovariële reserve, is het belangrijk om verlies van eierstokschorsblokjes te voorkomen. Als de IVA-canule niet beschikbaar is, kunt u proberen een vergelijkbare canule te vinden om te kunnen gebruiken onder laparoscopische chirurgie.
De achteruitgang van de ovariële functie wordt geleidelijk veroorzaakt door veroudering en sommige pathofysiologische aandoeningen 23,24,25. Aldus, in ongehuwde vrouwen met ernstige ovariële disfunctie, is het vruchtbaarheidsbehoud belangrijk om toekomstige zwangerschap toe te staan. Voor deze patiënten werden de methoden van oöcyten of cryopreservatie van eierstokweefsel gerapporteerd26,27,28,29. Hoewel oöcyt cryopreservatie een gevestigde methode is voor vruchtbaarheidsbehoud1,2, kunnen deze patiënten een zeer beperkt aantal opvraagbare oöcyten hebben, zelfs na ovariële hyperstimulatie als gevolg van lage ovariële reserve. Bovendien werd bij oudere patiënten met ovariële disfunctie een hoge incidentie van chromosoomafwijkingen gemeld in eicellen26,30. Dit leidt tot de eis van meerdere dure procedures om voldoende oöcyten te garanderen om zwangerschap te garanderen. Om deze problemen op te lossen, hebben we de medicijnvrije IVA-aanpak ontwikkeld voor het verhogen van het aantal volwassen oöcytcellen voor het ophalen van oöcyten. Omdat oöcyt cryopreservatie niet langer een experimentele methode31,32is, wordt verwacht dat de medicijnvrije IVA gevolgd door oöcyt cryopreservatie een veelbelovende methode is voor vruchtbaarheidsbehoud bij ongehuwde vrouwen met ernstige ovariële disfunctie. Toekomstige klinische studies met behulp van de bevriezen ontdooide oöcyten verkregen uit de geneesmiddelvrije IVA zullen echter nodig zijn om de effectiviteit van deze aanpak voor vruchtbaarheidsbehoud bij ongehuwde vrouwen met ernstige ovariële disfunctie te bepalen.
Tot slot ontwikkelden we de medicijnvrije IVA als een nieuwe benadering van onvruchtbaarheidsbehandeling voor POR-patiënten met afnemende ovariële reserve en toonden we het gedetailleerde laboratoriumprotocol om onze procedures te kunnen herhalen. De methodologische beperkingen van geneesmiddelvrije IVA zijn moeilijk te voorspellen van het resterende follikelgetal vóór de operatie en ook het onvermogen om de overleving van de prothese te evalueren. De laboratoriumtechniek van geneesmiddelvrije IVA zou de basis kunnen worden voor toekomstige toepassing van eierstokweefselkweek om volwassen oöcyten te verkrijgen zonder te enten.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs bevestigen dat ze geen belangenverstrengeling hebben.
Acknowledgments
We danken Tatsuji Ihana, Sachiyo Kurimoto, Kazuko Takahasih, Yuki Yoshizawa, Maho Arashi, Kentaro Fujita, Erina Kudo, Yuka Kurimoto en Mayuko Wakatsuki voor het ondersteunen van de drugsvrije IVA-procedure en prof. Aaron J.W. Hsueh (Stanford University School of Medicine, Stanford, CA) voor het kritisch lezen en bewerken van het manuscript. We danken ook Rebecca Truman en Gregory Truman voor het invoegen van Engelse vertelling. Deze studie werd ondersteund door The Japan Society for the Promotion of Science (JSPS), Scientific Research B (19H03801) en Challenging Exploratory Research (18K19624).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 4.5 onz specimen container | FALCON | 354013 | Other products may also be suitable |
| 60mm dish | FALCON | 351007 | Other products may also be suitable |
| 50 x 50 cm sterile drape | HOGY Medical | SR-823 | Any type of sterile produsts may also be suitable |
| Disposable pippete | FALCON | 357575 | Other products may also be suitable |
| Fine scissors, Curved | WPI | #14224-G | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
| Hot plate | TOKAI HIT | TPiE-SP | Use at operation room to maintain the temperature of dishes containing ovarian tissue before transplantation |
| Human Serum Albumin Solution | Irvine Scientific | 9988 | Medium for handling ovarian tissue |
| IVA cannule | KITAZATO | 446030 IVA-6030E | Specific cannula for tissue autografting |
| KAI medical Disposable scalpel | WPI | #5 10-A | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
| Micro scissors, Curved | WPI | #503364 | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
| Modified HTF Medium-HEPES | Irvine Scientific | 90126 | Medium for handling ovarian tissue |
| Sterile gauze | Osaki Medical | 15004 | Any type of sterile produsts may also be suitable |
| Swiss Tweezers, Curved Tips | KAI | #504505 | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
References
- Liang, T., Motan, T. Mature Oocyte Cryopreservation for Fertility Preservation. Advances in Experimental Medicine and Biology. 951, 155-161 (2016).
- Yoon, T. K., et al. Live births after vitrification of oocytes in a stimulated in vitro fertilization-embryo transfer program. Fertility and Sterility. 79 (6), 1323-1326 (2003).
- Donnez, J., et al. Livebirth after orthotopic transplantation of cryopreserved ovarian tissue. Lancet. 364 (9443), 1405-1410 (2004).
- Meirow, D., et al. Pregnancy after transplantation of cryopreserved ovarian tissue in a patient with ovarian failure after chemotherapy. New England Journal of Medicine. 353 (3), 318-321 (2005).
- De Vos, M., Devroey, P., Fauser, B. C.
- Scott, R. T., et al. Follicle-stimulating hormone levels on cycle day 3 are predictive of in vitro fertilization outcome. Fertility and Sterility. 51 (4), 651-654 (1989).
- Ferraretti, A. P., et al. ESHRE consensus on the definition of 'poor response' to ovarian stimulation for in vitro fertilization: the Bologna criteria. Human Reproduction. 26 (7), 1616-1624 (2011).
- Huhtaniemi, I., et al. Advances in the Molecular Pathophysiology, Genetics, and Treatment of Primary Ovarian Insufficiency. Trends in Endocrinology and Metabolism. 29 (6), 400-419 (2018).
- Męczekalski, B., Maciejewska-Jeske, M., Podfigurna, A. Reproduction in premature ovarian insufficiency patients - from latest studies to therapeutic approach. Prz Menopauzalny. 17 (3), 117-119 (2018).
- Baker, V. Life plans and family-building options for women with primary ovarian insufficiency. Seminars in Reproductive Medicine. 29 (4), 362-372 (2011).
- Englert, Y., Govaerts, I. Oocyte donation: particular technical and ethical aspects. Human Reproduction. 13, Suppl 2 90-97 (1998).
- Englert, Y., Rodesch, C., Laruelle, C., Govoerts, I. Oocyte donation: ethical aspects related to the donor. Contraception, Fertilite, Sexualite. 25 (3), 251-257 (1997).
- Storgaard, M., et al. Obstetric and neonatal complications in pregnancies conceived after oocyte donation: a systematic review and meta-analysis. BJOG: An International Journal of Obstetrics and Gynaecology. 124 (4), 561-572 (2017).
- Storgaard, M., Malchau, S., Loft, A., Larsen, E., Pinborg, A. Oocyte donation is associated with an increased risk of complications in the pregnant woman and the fetus. Ugeskrift for Laeger. 179 (11), (2017).
- Kawamura, K., et al. Hippo signaling disruption and Akt stimulation of ovarian follicles for infertility treatment. Proceedings of the National Academy of Sciences. 110 (43), 17474-17479 (2013).
- Hsueh, A. J., Kawamura, K., Cheng, Y., Fauser, B. C.
- Li, J., et al. Activation of dormant ovarian follicles to generate mature eggs. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (22), 10280-10284 (2010).
- Suzuki, N., et al. Successful fertility preservation following ovarian tissue vitrification in patients with primary ovarian insufficiency. Human Reproduction. 30 (3), 608-615 (2015).
- Tanaka, Y., Hsueh, A. J., Kawamura, K. Surgical approaches of drug-free in activation and laparoscopic ovarian incision to treat patients with ovarian infertility. Fertility and Sterility. , (2020).
- Kawamura, K., Ishizuka, B., Hsueh, A. J. W. Drug-free in-vitro activation of follicles for infertility treatment in poor ovarian response patients with decreased ovarian reserve. Reproductive Biomedicine Online. 40 (2), 245-253 (2020).
- Haino, T., et al. Determination of Follicular Localization in Human Ovarian Cortex for Vitrification. Journal of Adolescent and Young Adult Oncology. 7 (1), 46-53 (2018).
- Baird, D. T., Webb, R., Campbell, B. K., Harkness, L. M., Gosden, R. G. Long-term ovarian function in sheep after ovariectomy and transplantation of autografts stored at -196 C. Endocrinology. 140 (1), 462-471 (1999).
- Qin, Y., Jiao, X., Simpson, J. L., Chen, Z. J. Genetics of primary ovarian insufficiency: new developments and opportunities. Human Reproduction Update. 21 (6), 787-808 (2015).
- Domniz, N., Meirow, D. Premature ovarian insufficiency and autoimmune diseases. Best Practice & Research: Clinical Obstetrics & Gynaecology. 60, 42-55 (2019).
- Laven, J. S.
- Grynberg, M., et al.
- Tomao, F., Spinelli, G. P., Panici, P. B., Frati, L., Tomao, S. Ovarian function, reproduction and strategies for fertility preservation after breast cancer. Critical Reviews in Oncology/Hematology. 76 (1), 1-12 (2010).
- Kim, S., Lee, Y., Lee, S., Kim, T. Ovarian tissue cryopreservation and transplantation in patients with cancer. Obstetrics & Gynecology Science. 61 (4), 431-442 (2018).
- Donnez, J., Dolmans, M. M. Ovarian tissue freezing: current status. Current Opinion in Obstetrics and Gynecology. 27 (3), 222-230 (2015).
- Wu, R. C., Kuo, P. L., Lin, S. J., Liu, C. H., Tzeng, C. C. X chromosome mosaicism in patients with recurrent abortion or premature ovarian failure. Journal of the Formosan Medical Association. 92 (11), 953-956 (1993).
- De Munck, N., Vajta, G. Safety and efficiency of oocyte vitrification. Cryobiology. 78, 119-127 (2017).
- Argyle, C. E., Harper, J. C., Davies, M. C. Oocyte cryopreservation: where are we now. Human Reproduction Update. 22 (4), 440-449 (2016).
