Summary
Vi presenterar detaljer om laboratorieförfaranden för läkemedelsfri in vitro aktivering (IVA) av äggstockssäckar för patienter med allvarliga äggstockscancer dysfunktion. Denna metod kan öka antalet återvinningsbara äggceller per äggstockscancer hyperstimulering och gynna fertilitet bevarande för dessa patienter.
Abstract
Äggstocksfunktionen minskar gradvis under åldrande och i vissa patofysiologiska tillstånd inklusive karyotyp onormala tillstånd, autoimmuna sjukdomar, cellgifts- och strålningsbehandlingar, samt äggstocksoperationer. Hos ogifta kvinnor med svår äggstocksdysfunktion är fertilitetsbevarande viktigt för framtida graviditeter. Även om oocyte cryopreservation är en etablerad metod för fertilitet bevarande, dessa patienter kunde endast bevara ett begränsat antal äggceller även efter äggstockscancer överstimulering, vilket leder till upprepade stimuleringar för att säkerställa tillräckliga äggceller för att garantera framtida graviditet. För att lösa detta problem har vi nyligen utvecklat ett läkemedelsfritt in vitro-aktiveringsförfarande (IVA), som gör det möjligt för oss att stimulera tidiga stadier av äggstockssäckar att utvecklas till preantral follikelstadiet. Dessa preantrala folliklar kan svara på det unika protokollet av gonadotropin stimulering, vilket resulterar i ökat antal hämtade äggceller per äggstockscancer stimulering för cryopreservation. Den läkemedelsfria IVA består av kirurgiska tillvägagångssätt och äggstocksstimulering. Vi tog bort en del av cortex från en eller båda äggstockarna från patienter under laparoscopic kirurgi. Äggstockscancer när vävnader skars i små kuber för att störa Hippo signalering utbildningsavsnitt och stimulera utvecklingen av tidiga skede folliklar. Dessa kuber ympades orthotropically i återstående äggstockar samt under serosa av båda äggledare. Vi har redan publicerat det kirurgiska ingreppet i den läkemedelsfria IVA och protokollet om efterföljande äggstocksstimulering, men häri presenterar vi detaljerna i laboratoriemetoder som krävs för läkemedelsfri IVA.
Introduction
Äggstocksfunktionen minskar gradvis under åldrande och vissa patofysiologiska tillstånd inklusive karyotyp onormala tillstånd, autoimmuna sjukdomar, cellgifts- och strålning-terapier och äggstocksoperationer. Fertilitet bevarande är ett av de bästa alternativen för ogifta kvinnor med svår äggstockscancer dysfunktion för att bevara sin potential för framtida graviditet. För fertilitetsbevarande är för närvarande två metoder tillgängliga mestadels i onko-fertilitetsfältet. Oocyte cryopreservation är ett väletablerat förfarande för fertilitet bevarande och många framgångsrika fall harrapporterats 1,2. Å andra sidan inrättades äggstocksvävnads cryopreservation också för fertilitetsbevarande hos cancerpatienter men det är fortfarande en experimentell strategi3,4. I båda metoderna behövs flera antal mogna äggceller för att graviditet ska inträffa. I allmänhet visade patienter med för tidig äggstocksbrist (POI), som blir amenorré före 40 års ålder, och medelålders kvinnor med låg äggstocksreserv dålig äggstockssvar (POR) på äggstocksstimulering för att ge mogna äggceller5,6,7. Dessutom visade unga patienter med ett lågt antal antral folliklar också POR till äggstocksstimulering7. Dessa patienter har mycket begränsat antal återvinningsbara äggceller även efter korrekt äggstockscancer hyperstimulering, vilket kräver flera dyra förfaranden för att säkerställa ett tillräckligt antal äggceller för graviditet.
Oocyt donation följt av in vitro befruktning (IVF) med makens spermier och embryo överföring (ET) är det enda alternativet för dessa POI och POR patienter som har svårt att få sina egna äggceller8,9,10. Oocyte donation kompliceras dock av etiska frågor samt autoimmuna och graviditet komplikationer11,12,13,14. För att lösa dessa problem önskas etablering av infertilitetsbehandling med patienternas egna äggceller. För POI-patienter har vi utvecklat in vitro aktivering (IVA) strategi för att möjliggöra framgångsrik follikel tillväxt och generering av mogna äggceller, leder ett antal graviditeter och leveranser15. I IVA fragmenterade vi äggstocksbarkar efter avlägsnande av äggstockar under laparoskopisk kirurgi och odlade dem i två dagar för att aktivera folliklar av Akt-stimulerande läkemedel och sedan utföra heterotopisk ympning tillbaka till konstgjorda påsar gjorda under serosa av äggledare under andra laparoskopisk kirurgi15. Detta förfarande främjade tillväxt av ursprungliga, primära och sekundära folliklar efter äggstockscancer cortex fragmentering för att främja Hippo signalering störningar16, följt av två dagar kultur med Akt signalering stimulatorer17.
Till skillnad från allvarliga POI fall, POR patienter med minskad äggstockscancer reserv har flera sekundära folliklar. Eftersom Hippo signalering störningar ensam är effektivt för att främja sekundär follikeltillväxt 16, visade vi nyligen framgångsrika graviditeter och leveranser för POR patienter med hjälp av den läkemedelsfria IVA förfarande som omfattar när fragmentering och ortopic ympning utan behandling av Akt stimulerande läkemedel. Läkemedelsfri IVA stimulerar tidigt stadium av äggstockssäckar att utvecklas till preantral follikelstadiet efter endast en operation och ökade antalet hämtade äggceller för IVF-embryoöverföring15,18. Den läkemedelsfria IVA-metoden har flera fördelar jämfört med vår ursprungliga IVA med 1) undvika potentiella follikel förlust under kultur, 2) minimera invasivitet och kostnader för den andra kirurgi, 3) omfattar endast kortsiktiga post-surgery säng vila och 4) potential av spontana graviditet på grund av att ortopic ympning. Vi publicerade nyligen en videoartikel som visar kirurgiska ingrepp av läkemedelsfri IVA19 och detaljerade protokoll av äggstocksstimulering efter operationen20. Här presenterar vi detaljer om laboratoriemetoder som krävs för läkemedelsfri IVA.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Skriftligt informerat samtycke erhölls från varje POR-patient med minskande äggstocksreserv som skrev in sig i den läkemedelsfria IVA-behandlingen. Denna studie godkändes av etikkommittén vid International University of Health and Welfare (nr 17-S-21). Klinisk prövning registrerades under nummer UMIN000034464 och genomfördes i enlighet med Världsmedicinska föreningens etiska kod (Helsingforsdeklarationen).
1. Utvinning av äggstocksbark
- Ta bort en del av äggstocksbarken (10 x 10 mm, 2-3 mm tjocklek) från en eller båda äggstockarna under allmän anestesi genom laparoskopisk kirurgi som tidigarebeskrivits 19,20.
- Placera de uppsamlade äggstocksbarken i en steril behållare som innehåller 10 ml modifierad HTF (mHTF) vid 37 °C.
2. Fragmentering av äggstocksbarken
OBS: Innan äggstocksbarken dissekering, värm upp mHTF till 37 °C. Håll sterila förhållanden under hela proceduren. Alla verktyg för den här proceduren visas i Materialförteckningen.
- Placera de uppsamlade äggstocksbarken i en plastform som innehåller 5-10 ml mHTF vid 37 °C och placera dem på värmeplattan för att bibehålla vävnaden vid 37 °C (figur 2A).
- Ta en bild av varje cortex med hjälp av en digitalkamera med patientens namn innan du påbörjar nästa procedur för att länka patientbakgrundsdata.
- Placera en enskild cortex på en steril gasväv fuktad med mHTF (Figur 2B).
OBS: Applicera ytterligare mHTF med en engångspipett på gasväven för att förhindra att cortexytan torkas ut under denna procedur. - Ta bort kvarvarande medullavävnad där den ser rosa ut med en mikrosax så att vävnadens tjocklek når 1-2 mm (figur 2C och D).
OBS: För att undvika förlust av folliklar i tidigt skede, förbered inte kortikala remsor mindre än 1 mm i tjocklek, eftersom de tidiga folliklarna ligger inom 1-2 mm från ytan av äggstocksbarken21. - Dissekera en 1 mm x 1 mm x 5 mm vävnadsbit från varje äggstockscancer kortikal remsa med hjälp av en fin skalpell och utsätta den för histologisk analys för att bestämma förekomsten av kvarvarande folliklar enligttidigare beskrivna 18 (figur 2E).
OBS: De dissekerade vävnaderna för histologi är nedsänkta i mHTF och håller sig vid 4 °C tills de fixeras (figur 2F, se steg 4). - Skär cortex i 1 mm x 1 mm x 10 mm remsor med en fin skalpell (Figur 2G).
OBS: Det är lättare att skära genom att trycka ner skalpellen än genom att dra i den. - Skär dessa vävnadsremsor i 1 mm x 1 mm x 1 mm små kuber (Figur 2H).
OBS: För att undvika förändringar av osmotiskt tryck i mediet, tillsätt mHTF med måtta före automatisk autografering av vävnaden.
3. Automatisk ympning av äggstockscancer kortikala fragment
- Öppna IVA-kanylförpackningen och lägg den på ett sterilt draperi.
- Skölj insidan av IVA-kanylen med mHTF genom att aspirera och ladda ur mHTF flera gånger.
- Aspirera 100-200 μL mHTF för att fylla spetsen på IVA-kanylen för att undvika att kortikala kuberna torkar ut under belastning (figur 3A).
- Ladda kortikala kuberna i spetsen på IVA-kanylen med en fin pincett (Figur 3B-E).
OBS: Antalet kortikala kuber för lastning beror på ympningsstället. I allmänhet kan 20-30 kuber transplanteras till en ortopedisk återstående äggstock, medan 10-15 kuber kan transplanteras till en påse under serosa av äggledarna. - Efter att ha laddat de kortikala kuberna, håll kanylspetsen som innehåller de kortikala kuberna med fingrarna tills du överför IVA-kanylen till en kirurg. Detta undviker kubtemperaturen för att minska.
OBS: Detaljerna i autografting förfarande under laparoscopic kirurgi har rapporterats tidigare19. För ympning av äggstockscancer när kuber, en kanylformad enhet (IVA kanyl) utvecklats av vår samarbetspartner, Kitazato Corporation.
4. Histologisk analys av äggstocksbarken
OBS: För att räkna antalet kvarvarande folliklar, utför histologisk analys som tidigarebeskrivits 15.
- Markera den kortikala remsan med ett vävnadsmarkeringsfärgämne före provfixering. Detta kommer att indikera sidan av cortex i remsan för histologi.
- Fixera vävnadsremsorna över natten vid 4 °C med Bouins lösning.
OBS: För att upptäcka atretiska folliklar rekommenderar vi inte att du använder paraformaldehyd för fixering för att undvika krympning av oocytcytoplasma. - Torka ut och bädda in vävnadsremsorna i paraffin.
- Sektion seriellt paraffinblocket som innehåller vävnadsprovet.
- Färga varje sektion med hematoxylin och eosin för att visualisera folliklarna.
- Räkna folliklarna som tidigare beskrivits17.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
I den första publiceringen av IVA-metoden15transplanterade vi äggstockscancer kortikala kuber en efter en till ympningsplatserna under laparoskopisk kirurgi (Figur 1A). Eftersom 100-150 äggstockscancer kuber användes, tog det 3-4 timmar för vävnad ympning under laparoscopic kirurgi. Dessutom förlorades några äggstockskuber innan ympning. Eftersom IVA-kanylen kan överföra 20-30 kuber till en ympningsplats på en gång (figur 1B), kan vi förkorta drifttiden till 1-2 timmar. Dessutom kan IVA-kanylen eliminera förlusten av äggstockscancer när kuber under kirurgi.
Figur 1: IVA-kanylens effektivitet. (B) Den nuvarande metoden med transplantation av 20-30 kuber samtidigt med hjälp av IVA-kanylen. Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Figur 2: Dissekering av äggstocksvävnad för läkemedelsfri IVA. A)En bit äggstocksbark placeras i en plastfat som innehåller mHTF vid 37°C. (B)För att avlägsna kvarvarande medullavävnader placeras äggstocksbarken på en fuktad gasväv. C)Medullavävnad avlägsnas med en fin mikrosax. D)Tjocklekenpå cortex som ska beredas är mellan 1 och 2 mm. (E) Efter avlägsnande av medullavävnad dissekeras en 1 mm x 1 mm x 5 mm vävnadsstycke från varje äggstockscancer kortikala remsa för histologisk analys. F)Den dissekerade vävnaden lagras i 1,5 ml rör som innehåller mHTF vid 4 °C tills den fixeras för histologi. (G och H) Äggstocksbarken skärs i 1 mm x 1 mm x 10 mm remsor och skärs sedan ytterligare i 1 mm x 1 mm x 1 mm små kuber med en fin skalpell. Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Figur 3: Automatisk ympning av äggstockscancer kortikala fragment. (A) Före lastning av kuber aspireras 100-200 μL mHTF för att fylla spetsen på IVA-kanylen för att undvika att de kortikala kuberna torkar ut under belastning (B-E) Lastning av äggstockscancer kortikala kuber i spetsen på IVA-kanylen. Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I detta manuskript visade vi ett detaljerat laboratorieprotokoll för drogfri IVA. Den läkemedelsfria IVA är ett nytt tillvägagångssätt för infertilitetsbehandling för POR- patient med minskande äggstocksreserv för att främja sekundär folliklar tillväxt, vilket resulterar i att ge mer mogna äggstockscancer stimulering och öka i framgångsrikgraviditet 20. Hos 15 POR patienter med minskande äggstockscancer reserv, uppnådde detta tillvägagångssätt en spontan graviditet, in vitro befruktning-embryo överföring tillät fyra levande födslar, tillsammans med en pågående graviditet19.
För beredning av ympning äggstockscancer cortex, medulla vävnad togs bort med hjälp av en mikro-sax med 1-2 mm tjocklek. Tidigare visade vi att ursprungliga, primära och majoriteten av sekundära folliklar var belägna inom 1 mm tjocklek från ytan av äggstockscancer cortex hos patienter med normala äggstockscancerreserv 21. I POI patienter fann vi att sekundära folliklar var belägna djupare än 1 mm men inom 2 mm från ytan av äggstockscancer cortex21. Antral folliklar är kända för att lokalisera i medullavävnader 21, men ingen follikel hittades i medulla vävnader hos POIpatienter 21. Även om POR patienter med minskande äggstockscancer reserv kan ha antral folliklar i medulla vävnad, är antral folliklar svåra att överleva efter ympning på grund av brist på blodkärl kommunikation22. Därför bestämde vi tjockleken på äggstocksbarken att vara 1-2 mm och det kritiska steget inom protokollet gör inte de kortikala remsorna < 1-2 mm för att undvika förlust av värdefulla kvarvarande folliklar. Under beredning av när remsor och kuber använde vi mHTF, men man kan använda liknande medium som inkluderar 4-(2-hydroxyetyl)-1-piperazineethanesulfonic syra (HEPES) buffert.
I denna procedur transplanterade vi äggstocksbarken efter att ha skurit den i 1 mm3 kuber 15,20. På grund av svårigheten att hantera sådana små fragment för ympning, tidigare ympning äggstockscancer kuber en efter en under laparoscopic kirurgi tog 3-4 timmar med vissa kuber ibland gick vilse under kirurgi. Efter utvecklingen av IVA-kanylen kunde vi förkorta driftstiden till 1-2 timmar, vilket resulterade i att invasiviteten i operationen minimerades så att den läkemedelsfria IVA blev en enda dag-operation. Dessutom kan vi eliminera förlusten av äggstockscancer när kuber under kirurgi. På grund av begränsat antal folliklar i äggstockscancer cortex hos POR patienter med minskande äggstockscancer reserv, Är det viktigt att undvika förlust av äggstockscancer när kuber. Om IVA-kanylen inte är tillgänglig kan du försöka hitta en liknande kanyl som kan användas under laparoskopisk kirurgi.
Nedgången av äggstocksfunktionen orsakas gradvis av åldrande och vissa patofysiologiska tillstånd 23,24,25. Således, hos ogifta kvinnor med svår äggstocksdysfunktion, är fertilitetsbevarande viktigt för att tillåta framtida graviditet. För dessa patienter rapporterades metoderna för äggstockscancer eller äggstocksvävnad cryopreservation26,27,28,29. Även om oocyte cryopreservation är en etablerad metod för fertilitet bevarande1,2, dessa patienter kan ha mycket begränsat antal återvinningsbara äggceller även efter äggstockscancer hyperstimulering på grund av låg äggstockscancer reserv. Dessutom, hos åldrande patienter med äggstockscancer dysfunktion, rapporterades hög incidens av kromosom avvikelser i ägglossade ägglossade äggceller26,30. Detta leder till kravet på flera dyra förfaranden för att säkerställa tillräckligt antal äggceller för att garantera graviditet. För att lösa dessa problem har vi utvecklat den läkemedelsfria IVA-metoden för att öka antalet mogna äggceller för oocythämtning. Eftersom oocyte cryopreservation inte längre är en experimentell metod31,32, den drogfria IVA följt av oocyte cryopreservation förväntas vara en lovande metod för fertilitet bevarande hos ogifta kvinnor med allvarliga äggstockscancer dysfunktion. Framtida kliniska studier med hjälp av frys tinade äggceller som erhållits från den läkemedelsfria IVA kommer dock att krävas för att fastställa effektiviteten av detta tillvägagångssätt för fertilitetsbevarande hos ogifta kvinnor med svår äggstocksdysfunktion.
Sammanfattningsvis utvecklade vi den läkemedelsfria IVA som ett nytt tillvägagångssätt för infertilitetsbehandling för POR-patient med minskande äggstocksreserv och visade detaljlaboratorieprotokollet för att kunna upprepa våra procedurer. De metodologiska begränsningarna för läkemedelsfri IVA är svårigheter att förutsäga återstående follikel antal före operationen och även oförmåga att utvärdera transplantatet överlevnad. Laboratorietekniken för läkemedelsfri IVA kan bli grunden för framtida tillämpning av äggstocksvävnadskultur för att erhålla mogna äggceller utan ympning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna bekräftar att de inte har någon intressekonflikt.
Acknowledgments
Vi tackar Tatsuji Ihana, Sachiyo Kurimoto, Kazuko Takahasih, Yuki Yoshizawa, Maho Arashi, Kentaro Fujita, Erina Kudo, Yuka Kurimoto och Mayuko Wakatsuki för att de stöder det drogfria IVA-förfarandet och prof. Aaron J.W. Hsueh (Stanford University School of Medicine, Stanford, CA) för kritisk läsning och redigering av manuskriptet. Vi tackar också Rebecca Truman och Gregory Truman för att de infogade engelsk berättelse. Denna studie stöddes av The Japan Society for the Promotion of Science (JSPS), Scientific Research B (19H03801) och Challenging Exploratory Research (18K19624).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 4.5 onz specimen container | FALCON | 354013 | Other products may also be suitable |
| 60mm dish | FALCON | 351007 | Other products may also be suitable |
| 50 x 50 cm sterile drape | HOGY Medical | SR-823 | Any type of sterile produsts may also be suitable |
| Disposable pippete | FALCON | 357575 | Other products may also be suitable |
| Fine scissors, Curved | WPI | #14224-G | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
| Hot plate | TOKAI HIT | TPiE-SP | Use at operation room to maintain the temperature of dishes containing ovarian tissue before transplantation |
| Human Serum Albumin Solution | Irvine Scientific | 9988 | Medium for handling ovarian tissue |
| IVA cannule | KITAZATO | 446030 IVA-6030E | Specific cannula for tissue autografting |
| KAI medical Disposable scalpel | WPI | #5 10-A | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
| Micro scissors, Curved | WPI | #503364 | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
| Modified HTF Medium-HEPES | Irvine Scientific | 90126 | Medium for handling ovarian tissue |
| Sterile gauze | Osaki Medical | 15004 | Any type of sterile produsts may also be suitable |
| Swiss Tweezers, Curved Tips | KAI | #504505 | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
References
- Liang, T., Motan, T. Mature Oocyte Cryopreservation for Fertility Preservation. Advances in Experimental Medicine and Biology. 951, 155-161 (2016).
- Yoon, T. K., et al. Live births after vitrification of oocytes in a stimulated in vitro fertilization-embryo transfer program. Fertility and Sterility. 79 (6), 1323-1326 (2003).
- Donnez, J., et al. Livebirth after orthotopic transplantation of cryopreserved ovarian tissue. Lancet. 364 (9443), 1405-1410 (2004).
- Meirow, D., et al. Pregnancy after transplantation of cryopreserved ovarian tissue in a patient with ovarian failure after chemotherapy. New England Journal of Medicine. 353 (3), 318-321 (2005).
- De Vos, M., Devroey, P., Fauser, B. C.
- Scott, R. T., et al. Follicle-stimulating hormone levels on cycle day 3 are predictive of in vitro fertilization outcome. Fertility and Sterility. 51 (4), 651-654 (1989).
- Ferraretti, A. P., et al. ESHRE consensus on the definition of 'poor response' to ovarian stimulation for in vitro fertilization: the Bologna criteria. Human Reproduction. 26 (7), 1616-1624 (2011).
- Huhtaniemi, I., et al. Advances in the Molecular Pathophysiology, Genetics, and Treatment of Primary Ovarian Insufficiency. Trends in Endocrinology and Metabolism. 29 (6), 400-419 (2018).
- Męczekalski, B., Maciejewska-Jeske, M., Podfigurna, A. Reproduction in premature ovarian insufficiency patients - from latest studies to therapeutic approach. Prz Menopauzalny. 17 (3), 117-119 (2018).
- Baker, V. Life plans and family-building options for women with primary ovarian insufficiency. Seminars in Reproductive Medicine. 29 (4), 362-372 (2011).
- Englert, Y., Govaerts, I. Oocyte donation: particular technical and ethical aspects. Human Reproduction. 13, Suppl 2 90-97 (1998).
- Englert, Y., Rodesch, C., Laruelle, C., Govoerts, I. Oocyte donation: ethical aspects related to the donor. Contraception, Fertilite, Sexualite. 25 (3), 251-257 (1997).
- Storgaard, M., et al. Obstetric and neonatal complications in pregnancies conceived after oocyte donation: a systematic review and meta-analysis. BJOG: An International Journal of Obstetrics and Gynaecology. 124 (4), 561-572 (2017).
- Storgaard, M., Malchau, S., Loft, A., Larsen, E., Pinborg, A. Oocyte donation is associated with an increased risk of complications in the pregnant woman and the fetus. Ugeskrift for Laeger. 179 (11), (2017).
- Kawamura, K., et al. Hippo signaling disruption and Akt stimulation of ovarian follicles for infertility treatment. Proceedings of the National Academy of Sciences. 110 (43), 17474-17479 (2013).
- Hsueh, A. J., Kawamura, K., Cheng, Y., Fauser, B. C.
- Li, J., et al. Activation of dormant ovarian follicles to generate mature eggs. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (22), 10280-10284 (2010).
- Suzuki, N., et al. Successful fertility preservation following ovarian tissue vitrification in patients with primary ovarian insufficiency. Human Reproduction. 30 (3), 608-615 (2015).
- Tanaka, Y., Hsueh, A. J., Kawamura, K. Surgical approaches of drug-free in activation and laparoscopic ovarian incision to treat patients with ovarian infertility. Fertility and Sterility. , (2020).
- Kawamura, K., Ishizuka, B., Hsueh, A. J. W. Drug-free in-vitro activation of follicles for infertility treatment in poor ovarian response patients with decreased ovarian reserve. Reproductive Biomedicine Online. 40 (2), 245-253 (2020).
- Haino, T., et al. Determination of Follicular Localization in Human Ovarian Cortex for Vitrification. Journal of Adolescent and Young Adult Oncology. 7 (1), 46-53 (2018).
- Baird, D. T., Webb, R., Campbell, B. K., Harkness, L. M., Gosden, R. G. Long-term ovarian function in sheep after ovariectomy and transplantation of autografts stored at -196 C. Endocrinology. 140 (1), 462-471 (1999).
- Qin, Y., Jiao, X., Simpson, J. L., Chen, Z. J. Genetics of primary ovarian insufficiency: new developments and opportunities. Human Reproduction Update. 21 (6), 787-808 (2015).
- Domniz, N., Meirow, D. Premature ovarian insufficiency and autoimmune diseases. Best Practice & Research: Clinical Obstetrics & Gynaecology. 60, 42-55 (2019).
- Laven, J. S.
- Grynberg, M., et al.
- Tomao, F., Spinelli, G. P., Panici, P. B., Frati, L., Tomao, S. Ovarian function, reproduction and strategies for fertility preservation after breast cancer. Critical Reviews in Oncology/Hematology. 76 (1), 1-12 (2010).
- Kim, S., Lee, Y., Lee, S., Kim, T. Ovarian tissue cryopreservation and transplantation in patients with cancer. Obstetrics & Gynecology Science. 61 (4), 431-442 (2018).
- Donnez, J., Dolmans, M. M. Ovarian tissue freezing: current status. Current Opinion in Obstetrics and Gynecology. 27 (3), 222-230 (2015).
- Wu, R. C., Kuo, P. L., Lin, S. J., Liu, C. H., Tzeng, C. C. X chromosome mosaicism in patients with recurrent abortion or premature ovarian failure. Journal of the Formosan Medical Association. 92 (11), 953-956 (1993).
- De Munck, N., Vajta, G. Safety and efficiency of oocyte vitrification. Cryobiology. 78, 119-127 (2017).
- Argyle, C. E., Harper, J. C., Davies, M. C. Oocyte cryopreservation: where are we now. Human Reproduction Update. 22 (4), 440-449 (2016).
