Nuclear Transfer in Maus-Oozyten

Also machen wir NU Nuclear Transfer, weil unsere Gruppe an der Reprogrammierung interessiert ist. Dies ist ein faszinierender Prozess, bei dem der differenzierte Zellkern in einen embryonalen Zustand umprogrammiert werden kann. Dies sind die Reagenzien Case SUM und HCCV und das ist Hyaluronidase.

Und zuerst bereite ich ein Gericht zu, und das geht in die Inkubatoren, um es mit einem CO2 gleichzusetzen. Dabei handelt es sich um Tropfen, es handelt sich um mehrere Tropfen für Turing, die mit Mineralöl überzogen sind. Also kalibrieren sie die CO2-Atmosphäre.

Lassen Sie nun HCZB fallen. Dieser wird zum Waschen verwendet. Diese ist an Tagen hoch und wieder mit diesem Mineralöl bedeckt.

Dieses High, das fällt mit Hyaluronidase. Dieser Teil hier sind nur HCCP-Tropfen. Diese sind zum Waschen.

Dies dient zur Entfernung von Ulu-Zellen von der O-Seite. Diese Bühne ist beheizt, damit sie sich erwärmt, bis ich zurückkomme und die Ölzeichen von den Mäusen bekomme und alles mit Mineralöl bedecke. Das hier sind PVP-Tropfen zum Reinigen der Nadel und zum Einsetzen der Zellen, und das ist HCCB plus Cyla B.Und hier werde ich die Manipulationen vornehmen.

Okay, das hier ist eine Nadelfarbe. Was ich jetzt tue, ist, dass ich eine Nadel ziehe. Okay, jetzt habe ich eine sehr schöne Nadel, sehr dünn.

Und jetzt ist das eine Mikroschmiede. Ich muss die Nadel an einer bestimmten Position schneiden, um die richtige Größe für die Pipette zu haben. Ich erhitze die Glaskugel, ich gehe hinunter, die Nadel schmilzt mit ihr, und jetzt ist sie zerbrochen.

Ich schiebe das weg. Ihr seht, die zerbrochene Nadel ist perfekt. Jetzt gehe ich hier runter, ich schiebe die Hitze hoch.

Jetzt wird die Glaskugel rot, sie schmilzt, schiebt die Glaskugel und sie macht eine Kurve. Das reicht. Ich entferne es.

Siehst du, dann führe ich die Nadel ein. Wir haben es einfach mit der Haltepipette in diesen Kopf gesteckt. Setzen Sie es nun wieder in das Mikroskop ein.

Mikropipette, Kapillare und I mit Quecksilber beladen. Ich habe es in diesen Tipp geladen. Quecksilber lädt diese Kapillare hier mit Quecksilber auf.

Es geht hinein. Setzen Sie die Nadel hier in diesen Kopf. Festschrauben, zurückziehen.

Wenn du dich hier im Uhrzeigersinn drehst, schiebst du das Quecksilber hier nach vorne, damit du es sehen kannst. Und jetzt die Spitze in das Öl. Siehe? Jetzt bewege ich mich also die Nadel nach unten, um die Vision zu bekommen.

Stoße einige Quecksilbertröpfchen aus und sauge etwas QVP auf. Das ist in Ordnung. Und dann wieder nach oben verschieben.

Ich gehe zum HCCB und bewege mich in das Loch hinunter. Mein Kopf, ich gehe zu P, das ist die Mauspipette. Ich muss eine Kapillare vorbereiten, um sie hier einzusetzen. Danke.Bereits.Gut.

Machen Sie also etwas Kapillare. Okay. Und in der Leitung. Ich bin ley.

Ich komme aus der Schweiz und habe vor einem Jahr mit dieser Arbeit begonnen und bin in das Labor von K'S gekommen und habe angefangen, den Nukleartransfer zu lernen. Es ist wirklich, es ist ein großartiger Ort hier und es ist großartig, hier zu arbeiten. Und, und natürlich ist dies ein sehr komplexes Experiment, bei dem viele Probleme auftreten können.

Wenn Sie also anfangen, können Sie auf Probleme stoßen, wie z. B. dass viele Zellen während der Keimbildung oder während des Transfers lysieren. Oder dann stellen Sie fest, dass sie sich nicht entwickeln, obwohl Sie erfolgreich übertragen haben. Und die gibt es immer, kann zahlreiche Gründe haben.

Ich meine, man kann mit dem Kultursystem aller Seiten beginnen. Man braucht also immer irgendwelche Kontrollen wie die Teile der genetischen Kontrolle oder irgendwelche befruchteten Kaiser, um das Kultursystem, die Brutkästen, zu testen. Und dann muss man auch die Fähigkeiten des Mikroskops verbessern.

Es braucht also einfach viel Übung, bis man die Seite zuverlässig intieren und dann wieder zurückübertragen kann. Das ist nur eine Frage der Übung und wir werden ein paar Wochen oder Monate brauchen, bis Sie gut darin sind. Und ansonsten ist es bereit für langwierige Experimente.

Es ist also gut, einen ganzen Tag dafür zu reservieren. Und dann ist am Anfang auch noch etwas knifflig das Mauspipettieren. Also, um keine Blasen zu machen, um es gut zu kontrollieren und nicht den Überblick zu verlieren, oder vor allem kann man auch einen Klon beschädigen, vor allem, weil die äußere Schicht, die Soo von Lucita, offen ist, es ist tatsächlich möglich, wenn man den Mund nimmt, man beschädigt diesen Klon und er tritt irgendwie aus dem Sonar Lucita aus.

Wenn also auch darauf geachtet werden muss, dass sich kein Öl im Mundrohr befindet. Nicht zu viel zu lutschen und nicht zu viel zu blasen, aber das ist relativ leicht zu erlernen, diese Fähigkeit.