Nuclear Transfer in Maus-Oozyten

Wir führen also die nukleare Übertragung durch, da unsere Gruppe an der Reprogrammierung interessiert ist. Dies ist ein faszinierender Prozess, bei dem der differenzierte Zellkern in einen embryonalen Zustand zurückprogrammiert werden kann. Dies sind die Reagenzien Fall SUM und HCCV sowie Hyaluronidase.

Und zuerst bereite ich eine Schale mit, und diese kommt in die Inkubatoren, um mit einem CO2 auszugleichen. Dies sind Tropfen, mehrere Tropfen für Turing, die mit Mineralöl bedeckt sind. So kalibrieren sie die CO2-Atmosphäre.

Geben Sie nun einen Tropfen HCZB hinzu. Dieser dient zum Waschen. Dieser ist an Tagen hoch und erneut mit diesem Mineralöl bedeckt.

Dieser hohe Wert sinkt mit Hyaluronidase. Diese hier sind nur HCCP-Tropfen. Diese dienen zum Waschen.

Dies dient zum Entfernen von ulu-Zellen von der O-Seite. Dieses Stadium wird beheizt, sodass es sich erwärmt, bis ich zurückkehre, um die Ölabscheidungen von den Mäusen zu entnehmen und alles mit Mineralöl zu bedecken. Hier handelt es sich um PVP-Tropfen zur Reinigung der Nadel und zum Einfüllen der Zellen, und dies ist HCCB plus Cyla B. Und hier werde ich die Manipulationen durchführen.

Okay, das hier ist eine Nadel-Farbe. Was ich jetzt mache, ist, eine Nadel zu ziehen. Gut, jetzt habe ich eine sehr feine, sehr dünne Nadel.

Und nun ist dies eine Mikroschmiede. Ich muss die Nadel an einer bestimmten Stelle abschneiden, um eine Haltepipette der richtigen Größe zu erhalten. Ich erhitze die Glasperle, senke die Nadel ab, sodass sie anschmilzt, und nun ist sie abgebrochen.

Ich schiebe das zur Seite. Sie sehen, die abgebrochene Nadel ist perfekt. Jetzt fahre ich hier hinunter und erhöhe die Hitze.

Jetzt wird die Glasrolle rot, sie wird schmelzen, schieben Sie die Glasrolle, und sie beschreibt eine Kurve. Das ist genug. Ich nehme sie heraus.

Sie sehen, dann führe ich die Nadel ein. Wir haben die Haltepipette gerade in diesen Kopf eingesetzt. Nun setzen Sie sie wieder zurück ins Mikroskop ein.

Mikropipette, Kapillare und I mit Quecksilber gefüllt. Ich habe es in diese Spitze geladen. Quecksilber füllt diese Kapillare hier mit Quecksilber.

Es wird nach innen gesteckt. Setzen Sie die Nadel hier in diesen Kopf ein. Festdrehen, dann zurückziehen.

Wenn Sie hier im Uhrzeigersinn drehen, wird das Quecksilber nach vorne geschoben, sodass Sie es sehen können. Und jetzt die Spitze in das Öl eintauchen. Sehen Sie? Nun bewege ich die Nadel nach unten, um die Sicht zu erhalten.

Drücken Sie einige Quecksilbertropfen aus und saugen Sie etwas QVP auf. Das ist in Ordnung. Bewegen Sie es dann erneut nach oben.

Ich gehe zur HCCB und bewege mich durch das Loch nach unten. Mein Kopf, ich gehe zu P, das ist die Maus-Pipette. Ich muss eine Kapillare vorbereiten, um sie hier einzuführen. Danke. Bereits. Gut.

Stellen Sie also eine Kapillare her. In Ordnung. Und in dem Rohr. Ich bin ley.

Ich komme aus der Schweiz und habe diese Arbeit vor einem Jahr begonnen, als ich in K'S Labor kam und mit dem Erlernen der Kerntransfer-Technik begann. Es ist wirklich ein großartiger Ort hier und es ist eine Freude, hier zu arbeiten. Natürlich handelt es sich bei diesem Experiment um eine sehr komplexe Aufgabe, bei der zahlreiche Probleme auftreten können.

Wenn Sie beginnen, können daher Probleme auftreten, wie beispielsweise das Lyse vieler Zellen während der Keimbildung oder während des Transfers. Oder Sie stellen fest, dass die Zellen trotz erfolgreichem Transfer nicht weiterentwickeln. Es kann immer zahlreiche Gründe dafür geben.

Ich meine, man kann mit dem Kultursystem aller Stellen beginnen. Man benötigt also immer einige Kontrollen wie Teile der genetischen Kontrolle oder befruchtete Eizellen, um das Kultursystem und die Inkubatoren zu testen. Außerdem muss man auch die Fähigkeiten im Umgang mit dem Mikroskop verbessern.

Es erfordert also viel Übung, bis Sie die Seite zuverlässig aufblasen und anschließend zurückübertragen können. Dies ist lediglich eine Frage der Übung, und es wird einige Wochen oder Monate dauern, bis Sie darin geübt sind. Ansonsten ist das Verfahren bereit für umfangreiche Experimente.

Daher ist es ratsam, dafür einen ganzen Tag einzuplanen. Etwas schwierig am Anfang ist außerdem das Pipettieren an der Maus. Es gilt, keine Blasen zu erzeugen, die Handhabung gut unter Kontrolle zu haben und den Überblick nicht zu verlieren, da man insbesondere einen Klon beschädigen kann, besonders weil die äußere Schicht, die sogenannte Lucita, offen ist. Tatsächlich kann es passieren, dass man beim Mundpipettieren den Klon beschädigt und dieser dann aus der Sonar-Lucita austritt.

Daher muss man auch darauf achten, kein Öl in dem Mundrohr zu haben. Nicht zu stark saugen und nicht zu stark blasen, doch diese Fähigkeit wird relativ leicht erworben.