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DOI: 10.3791/1639-v
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This study utilizes yeast as a model system to explore the functions of the human WRN gene, which is associated with Werner syndrome. The methods outlined facilitate the genetic characterization of this gene product within conserved cellular pathways.
Genetische Studien in Hefe kann eingesetzt werden, um die molekularen und zellulären Funktionen der menschlichen Gene in Zellen DNA-Stoffwechsel zu untersuchen. Es werden Methoden für die genetische Charakterisierung des menschlichen beschrieben
WRN-Plasmide werden mit der Restriktionsendonuklease-Zelle eins und der MLU-Zelle verdaut und Fragmente aus einem Gel gereinigt. Diese Expressionsvektoren, die mit Fragmenten von Zelle eins zu MLU eins verdaut werden, werden dann in die Zelle eins zu MLU eins des Hefevektors ligiert. Das Multi-Copy-Plasmid enthält auch einen wählbaren TRP one-Marker.
W Rrn-Konstrukte werden nach Standardprotokollen in Hefe umgewandelt und Transformanten werden auf synthetischen vollständigen Glukosemedien ohne Tryptophan ausgewählt. Einzelne Transformanten werden dann auf synthetische vollständige Glukosemedien gestreift, denen Tryptophan fehlt, und die Platten werden von der Masterplatte inkubiert. Um die Regeneration des langsam wachsenden Phänotyps in WRN-transformierten SGS zu analysieren, wurden die drei besten Transformanten des Doppelmutantenstamms auf Glukose- oder Galaktose-haltigen Platten gestreift.
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