Paarung und Eizellimplantation: Eine Methode, um Embryonen zu erzeugen und sie nach Entwicklungsstadien zu sortieren

- Beginnen Sie mit einem Paarungstank, einem Tank mit einem herausnehmbaren Einsatz, durch den die Eier fallen können. Geben Sie abends vor der Embryoentnahme zwei männliche und drei weibliche adulte Fische in ein geteiltes Paarungsbecken, um sich über Nacht aneinander zu gewöhnen.

Setzen Sie den Fisch am nächsten Morgen in ein neues Gatterbecken mit Systemwasser um und entfernen Sie die Trennwand. Warten Sie 15 bis 30 Minuten, um den Fischen Zeit zum Paaren und Laichen zu geben.

Sammeln Sie nun die Embryonen und lagern Sie sie in einer Petrischale, in der sich Hanks Embryomedium befindet. Bauen Sie sie während des gesamten Protokolls bei 28,5 Grad Celsius an. Untersuchen Sie die Morphologie von Embryonen unter einem Präpariermikroskop.

Sie werden mehrere Entwicklungsmerkmale beobachten. Durch die Spaltung der Blastoscheibe entstehen mehrere Zellen. Das Blastoderm nimmt die Form eines umgekehrten Bechers über der Dotterzelle an. Paraxiale Mesodermsegmente entwickeln sich im dorsalen Teil des Embryos und so weiter.

Nach 24 Stunden nach der Befruchtung sortieren Sie die Embryonen einfach nach Gesamtkörperlänge. Im Beispielprotokoll werden wir die Verpaarung von transgenen mCherry-Rep