Phasenkontrastmikroskopie zur Bewertung von Entwicklungsmutanten in Streptomyces

Beginnen Sie mit Agarplatten, die Kolonien von Wildtyp- und mutierten Stämmen von Streptomyces coelicolor, einem filamentösen Bodenbakterium, enthalten.

Legen Sie ein steriles Deckglas über einen Bereich mit dichtem Koloniewachstum, in dem die Luftfilamente, d. h. Filamente, die sich über die Kolonieoberfläche erstrecken, deutlich sichtbar sind.

Drücken Sie vorsichtig auf das Deckglas, um die Luftfilamente und die zugehörigen Sporen auf die Deckglasoberfläche zu übertragen.

Nehmen Sie anschließend einen Objektträger mit Eindeckmedium und montieren Sie das Deckglas mit der Zellseite nach unten, um die bakteriellen Strukturen zu erhalten.

Legen Sie den Objektträger auf einen Mikroskoptisch, geben Sie einen Tropfen Immersionsöl auf das Deckglas und richten Sie das Objektiv aus.

Erfassen Sie mit Hilfe der Phasenkontrastmikroskopie Bilder der Luftfilamente sowohl von Wildtyp- als auch von mutierten Stämmen.

Wildtyp-Filamente weisen gleichmäßig große, regelmäßig verteilte Sporen auf.

Im Gegensatz dazu weisen mutierte Stämme Defekte wie pralle Filamente, unregelmäßige Sporen oder lysierte Sporen auf, was phänotypische Unterschiede in der Entwicklung zwischen dem Wildtyp und den Mutanten zeigt.

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