Ein flüssiger Multiwell-Assay für das Screening von C. elegans-Knockdowns

JoVE Encyclopedia of Experiments

Mikrobiologie

0 Ansichten • 2:35 Min. • September 26th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nehmen Sie eine Multi-Well-Platte mit Agar-Medien, die mit RNAi-Bakterien vorgespottet sind, mit oder ohne genspezifisches Insert, das auf ein C. elegans-Gen abzielt.

Säen Sie synchronisierte Würmer im L1-Stadium in die Vertiefungen und inkubieren Sie sie, um die RNAi-Bakterien fressen zu können.

Das Insert produziert interferierende RNA, die auf bestimmte Wurmgene abzielt und einen genspezifischen Knockdown-Phänotyp erzeugt.

Geben Sie Puffer in die Vertiefungen und suspendieren Sie die Würmer vorsichtig wieder.

Übertragen Sie die Suspension auf eine Deep-Well-Platte und lassen Sie die Würmer sich durch die Schwerkraft absetzen.

Entfernen Sie den Überstand und behalten Sie etwas Puffer bei.

Waschen Sie die Würmer mit Puffer, entsorgen Sie dann den Überstand und lassen Sie eine kleine Menge Puffer übrig.

Nehmen Sie als Nächstes eine Multi-Well-Assay-Platte mit pathogenen Bakterien.

Geben Sie eine definierte Anzahl von Bekämpfungs- und Knockdown-Würmern in ihre jeweiligen Vertiefungen, um Wirt-Pathogen-Interaktionen zu ermöglichen. Die pathogenen Bakterien sezernieren Verbindungen, die das Absterben von Würmern auslösen.

Vergleichen Sie die Wurmmortalität, um die Auswirkungen des genspezifischen Knockdowns auf das Überleben von Würmern zu bewerten.

Fügen Sie einen Milliliter S Basal pro Vertiefung einer 24-Well-Platte hinzu, die 300 Würmer pro Vertiefung enthält. Rühren Sie die Würmer vorsichtig durch Schütteln der Platte und geben Sie die Würmer dann auf eine leere, sterile 24-Deep-Well-Platte.

Lassen Sie die Würmer sich durch die Schwerkraft ansiedeln, etwa fünf Minuten. Aspirieren Sie den Überstand, lassen Sie etwa einen Milliliter pro Vertiefung übrig, und fügen Sie dann 7 Milliliter S Basal in jede Vertiefung hinzu. Wiederholen Sie die Wäsche noch zwei weitere Male und saugen Sie dann nach der letzten Wäsche alle bis auf etwa 400 Mikroliter Überstand an.

Nachdem Sie die Bakterien in 384-Well-Platten pipettiert haben, um Hunger zu vermeiden, sortieren Sie mit der Resampler-Funktion des Wurmsortierers 22 Würmer in jede Vertiefung einer 384-Well-Platte. Fügen Sie schließlich nach dem Sortieren kleine Moleküle oder andere experimentspezifische Materialien hinzu.

11:31

Einrichtung eines Setup-Hochdurchsatz-Screening für kleine Moleküle, die Modulate c-di-GMP-Signalisierung in Pseudomonas aeruginosa

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

11:58

Der Fadenwurm Caenorhabditis Elegans - ein vielseitig In Vivo Modell zur Host-Mikroben-Interaktionen

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

11:40

Hochdurchsatz-Screening mikrobieller Isolate mit Auswirkungen auf die Gesundheit von Caenorhabditis elegans

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

14:53

High-Throughput-Screening und Biosensorik mit Fluorescent C. elegans Die Stämme

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

09:40

RNAi-Screening auf postembryonalen Phänotypen in Identifizieren C elegans

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

10:58

Quantitative und automatisierte Hochdurchsatz-genomweiten RNAi-Screens in C elegans

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

03:15

RNAi-Fütterung in Flüssigkultur: Eine Hochdurchsatzmethode zur Unterdrückung der Genexpression in C. elegans

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

06:28

C. elegans Chemotaxis-Assay

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

18:38

Groß Gene Knockdown in C. elegans Verwenden dsRNA Fütterung Bibliotheken zu Robust Loss-of-function Phänotypen generieren

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

11:43

Ein screenbaren In-vivo- Assay für Mitochondriale Modulatoren Verwendung transgener Bioluminescent Caenorhabditis elegans

Ähnliche Videos

0 Aufrufe

Zuletzt aktualisiert: 15 August 2026