JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:35 Min. • September 26th, 2025
Nehmen Sie eine Multi-Well-Platte mit Agar-Medien, die mit RNAi-Bakterien vorgespottet sind, mit oder ohne genspezifisches Insert, das auf ein C. elegans-Gen abzielt.
Säen Sie synchronisierte Würmer im L1-Stadium in die Vertiefungen und inkubieren Sie sie, um die RNAi-Bakterien fressen zu können.
Das Insert produziert interferierende RNA, die auf bestimmte Wurmgene abzielt und einen genspezifischen Knockdown-Phänotyp erzeugt.
Geben Sie Puffer in die Vertiefungen und suspendieren Sie die Würmer vorsichtig wieder.
Übertragen Sie die Suspension auf eine Deep-Well-Platte und lassen Sie die Würmer sich durch die Schwerkraft absetzen.
Entfernen Sie den Überstand und behalten Sie etwas Puffer bei.
Waschen Sie die Würmer mit Puffer, entsorgen Sie dann den Überstand und lassen Sie eine kleine Menge Puffer übrig.
Nehmen Sie als Nächstes eine Multi-Well-Assay-Platte mit pathogenen Bakterien.
Geben Sie eine definierte Anzahl von Bekämpfungs- und Knockdown-Würmern in ihre jeweiligen Vertiefungen, um Wirt-Pathogen-Interaktionen zu ermöglichen. Die pathogenen Bakterien sezernieren Verbindungen, die das Absterben von Würmern auslösen.
Vergleichen Sie die Wurmmortalität, um die Auswirkungen des genspezifisc
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