JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 4:00 Min. • October 30th, 2025
Nehmen Sie eine Kultur mit gentechnisch veränderten Bakterien.
Die Bakterien werden dazu angeregt, eine mutierte Variante der DNA-Polymerase mit fehlerhafter Korrekturleseaktivität zu exprimieren, was die Wahrscheinlichkeit eines Replikationsfehlers erhöht.
Diese Fehler können zu spontanen Mutationen in der regulatorischen Region führen, die das Beta-Glucosidase-Gen unterdrücken und die Expression des Beta-Glucosidase-Enzyms auslösen.
Sammeln Sie in regelmäßigen Zeitabständen Proben und bewerten Sie die Anzahl der Bakteriengenerationen in jeder Kultur. Die Proben werden zentrifugiert und der Überstand verworfen.
Suspendieren Sie das Pellet wieder in einem Puffer.
Fügen Sie eine permeabilisierende Lösung hinzu und mischen Sie, um die Bakterienmembran zu permeabilisieren.
Übertragen Sie die permeabilisierten Bakterienproben auf eine Multiwell-Platte.
Fügen Sie ein Substrat hinzu, das in die Bakterien eindringt und mit dem Beta-Glucosidase-Enzym reagiert, wodurch ein farbiges Produkt entsteht.
Messen Sie die Farbintensität, um die Beta-Glucosidase-Aktivität zu bestimmen.
Analysieren Sie die Beta-Glucosidase-Aktivität in den Bakterienkulturen, um die Mutationshäufigkeit über Generationen hinweg
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