Bewertung der Permeabilität der Zellschicht bei nicht replizierender persistenter Mycobacterium tuberculosis

Beginnen Sie mit Röhren, die das nicht replizierende persistente oder NRP-Stadium von Mycobacterium tuberculosis enthalten, das eine verdickte äußere Schicht aufweist.

Fügen Sie Glasperlen in ein Rohr und schütteln Sie es, um die äußere Schicht der Mykobakterien mechanisch zu zerstören und so die Durchlässigkeit zu erhöhen.

Als Nächstes wird die mit Perlen geschlagene mykobakterielle Suspension in ein frisches Rohr gegeben.

Fügen Sie fluoreszenzmarkiertes Rifampicin, ein Anti-Tuberkulose-Antibiotikum, sowohl den unbehandelten als auch den perlenbeschlagenen Zellsuspensionen hinzu.

Inkubieren Sie mit dem Schütteln, damit fluoreszenzmarkiertes Rifampicin in die Mykobakterien eindringen kann.

Mit der Zeit gelangt mehr Rifampicin in die Mykobakterien.

Zentrifugiere die Proben, um die Zellen zu trennen und das Überstandsmittel mit ungebundenem Rifampicin zu entfernen.

Die Mykobakterien in frischem Medium wieder suspendieren.

Analysieren Sie die Proben mittels Durchflusszytometrie. Wenn Zellen einen Laserstrahl durchqueren, emittieren sie Fluoreszenz, die proportional zum intrazellulären Fluoreszenz-Rifampicin ist.

Zu unterschiedlichen Zeitpunkten zeigen unbehandelte NRP-Zellen eine geringere Fluoreszenz als perlengeschlagene Zellen.

Dies deutet darauf hin, dass die verdickte äußere Schicht den Eintritt in Rifampicin einschränkt und so die bakterielle Persistenz während der Wirt-Pathogen-Interaktion unterstützt.