Visualisierung von pathogeninduziertem oxidativem Stress in C. elegans mit GFP-markierten SKN-1

Beginnen Sie mit zwei Platten, die C. elegans-Würmer enthalten, die grünes fluoreszierendes Protein, markiert SKN-1, exprimieren, einen Transkriptionsfaktor, der im Darmzytoplasma lokalisiert ist. Diese Würmer enthalten außerdem intestinale Lipofuscin-Granulate, die Autofluoreszenz zeigen.

Eine Platte ist mit nicht-pathogenen Bakterien als Kontrollgruppe besetzt, die andere mit pathogenen Bakterien als Testgruppe.

In der Testgruppe induziert das vom Erreger produzierte Wasserstoffperoxid oxidativen Stress, was die SKN-1-Translokation in die Darmkerne auslöst.

In der Kontrollgruppe bleibt der Großteil von SKN-1 diffus im Zytoplasma verteilt.

Wasche jede Platte mit einem Puffer und überfülle die Würmer in Röhren.

Zentrifuge, um die Würmer zu trennen und den Puffer zu entfernen.

Fügen Sie ein Medium mit Natriumazid hinzu, um sie zu betäuben.

Die Würmer auf Agarose-Pads montieren, Deckfolien platzieren und unter einem Fluoreszenzmikroskop beobachten. Verwenden Sie Autofluoreszenz, um die Kerngrenzen zu visualisieren.

Ein starkes nukleäres SKN-1-Signal im Test im Vergleich zum diffusen zytoplasmatischen Signal in Kontrollen weist auf eine nukleare Relokalisierung hin und bestätigt pathogeninduz