Gold-Immunfärbung von exosomalen Schnitten: Eine Technik zur Visualisierung diagnostischer Marker im exosomalen Lumen

Exosomen sind kleine extrazelluläre Vesikel, die eine Vielzahl von Biomolekülen umschließen, die als Krebs-Biomarker dienen.

Um exosomale Biomarker sichtbar zu machen, beginnen Sie mit ultradünnen, in Harz eingebetteten exosomalen Schnitten, die auf geeigneten Metallgittern für die Elektronenmikroskopie gestützt sind. Inkubieren Sie die Gitter in Glycintropfen. Glycin bindet und neutralisiert reaktive Aldehydgruppen in den Schnitten, um deren Interferenz mit dem Assay zu überwinden.

Spülen Sie die Probe mit Wasser ab, um Reagenzienreste zu entfernen. Inkubieren Sie die Probe anschließend in einem Blockierungspuffer. Der Puffer enthält Serumproteine, die unspezifische Antikörperbindungsstellen in der Probe blockieren.

Inkubieren Sie anschließend die Probe in der gewünschten Primärantikörperlösung. Diese Antikörper erkennen und binden an ihre Ziel-Biomarker, die im exosomalen Lumen lokalisiert sind. Ungebundene Antikörper werden mit einem geeigneten Puffer abgewaschen.

Übertragen Sie nun die probentragenden Gitter in Tropfen mit goldkonjugierten Sekundärantikörpern, die an die Primärantikörper binden. Die Gold-Nanopartikel dienen als elektronendichte Marker, um die feine Lokalisierun