Zelltod-Screening mittels DAPI-Färbung: Eine Methode zum schnellen Screening des IR-induzierten klonogenen Zelltods in krebsartigen Zelllinien

Die Exposition gegenüber ionisierender Strahlung wie Röntgenstrahlen kann DNA-Schäden verursachen, die schließlich zum Zelltod führen. Um die Wirkung ionisierender Strahlung auf das Zelltodprofil zu untersuchen, nehmen Sie zunächst eine Kulturschale mit adhärenten Krebszellen, die über die Oberfläche eines Deckglases gelegt wird.

Bestrahlen Sie die Kulturschale für die gewünschte Dauer mit Röntgenstrahlen. Diese Behandlung verursacht DNA-Schäden im Inneren der Zellen. Aspirieren Sie anschließend das verbrauchte Medium aus der Kulturschale und fügen Sie ein geeignetes Fixiermittel hinzu. Diese Lösung durchdringt die Zellen und fixiert die zellulären Komponenten während der nachfolgenden Färbeschritte.

Entsorgen Sie die Fixierlösung. Entfernen Sie das Deckglas mit röntgenbehandelten Zellen aus der Kulturschale. Drehen Sie das Deckglas um und legen Sie es auf die Oberfläche eines Objektträgers, über dem sich ein Tropfen DAPI-Fleck befindet, so dass die Zellen in direktem Kontakt mit DAPI stehen.

Die DAPI-Moleküle dringen in die Zellkerne ein und binden an die A-T-reichen Stellen der DNA. Visualisieren Sie nun die Zellen unter einem Fluoreszenzmikroskop. Die Kerne erscheinen blau und w