Amphotericin-B-vermittelte perforierte Patch-Clamp-Analyse: Eine elektrophysiologische Technik zur Untersuchung von Ionenströmen in Harnblasenzellen

Die

perforierte Patch-Clamp-Technik ermöglicht Echtzeitmessungen von Ionenströmen, die mit der Aktivität von Ionenkanälen auf Zellen wie Detrusor-Glattmuskelzellen (DSM) der Harnblase verbunden sind.

Laden Sie zunächst die DSM-Zellsuspension in eine Glaskammer und inkubieren Sie, um die Zelladhärenz zu ermöglichen. Als nächstes fügen Sie den anhaftenden Zellen eine extrazelluläre Lösung hinzu, die Tetraethylammonium- und Cäsium-Ionen enthält. Diese Kationen blockieren Kaliumkanäle auf der Zellmembran und hemmen die störenden Kaliumströme.

Nehmen Sie anschließend eine polierte Patch-Clamp-Pipette - ein dünnes hohles Glasröhrchen, das eine Aufnahmeelektrode enthält, die an einen Verstärker angeschlossen ist. Füllen Sie die Pipette mit einer intrazellulären Lösung und füllen Sie sie mit der gleichen Lösung auf, die jedoch Amphotericin-B, ein membranperforierendes Antibiotikum, enthält.

Tauchen Sie nun die Pipettenspitze in die extrazelluläre Lösung mit DSM-Zellen ein. Nachdem Sie das Potential und den Strom auf die entsprechenden Werte eingestellt haben, schieben Sie die Pipettenspitze in Richtung Zellmembran und überwachen Sie gleichzeitig den Elektrodenwiderstand.

Ein rascher Anstie