Expansion Pathology: Ein Verfahren zur hochauflösenden optischen Bildgebung klinischer Gewebeproben

Die Expansionspathologie (ExPath) ist eine Probenvorbereitungstechnik für biologische Proben, die es der konventionellen Lichtmikroskopie ermöglicht, nanoskalige Strukturen abzubilden, indem sie mit einem Polymersystem expandiert werden.

Nehmen Sie zunächst einen aufbereiteten immungefärbten Objektträger und bedecken Sie ihn mit einer Verankerungslösung, die sowohl Protein- als auch polymerreaktive Gruppen enthält. Die proteinreaktive Gruppe des Verankerungsreagenzes bindet an die Amine von Biomolekülen in Zellen.

Geben Sie dann eine geeignete Gelierlösung über die Probe und inkubieren Sie, damit sie im Gewebe diffundieren kann. Die polymerreaktive Gruppe des Verankerungsreagenzes bindet an die freien Monomere in der Gelierlösung, so dass sich die Biomoleküle bei der Polymerisation am Polymer verankern können.

Sobald die Polymerisation der Probe abgeschlossen ist, bedecken Sie den Objektträger mit einer Proteinaselösung. Proteinasen verdauen Proteine des Zytoskeletts, um strukturelle Widerstände zu beseitigen, so dass sich die Zellen ausdehnen können, ohne zu reißen. Beim enzymatischen Aufschluss löst sich die gelierte Probe vom Objektträger und geht in Suspension.

Füllen Sie nun d