JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 3:41 Min. • July 8th, 2025
Zur Analyse von DNA-Amplikons - amplifizierten DNA-Fragmenten spezifischer Länge -, die aus der Multiplex-Polymerase-Kettenreaktion (PCR) hervorgegangen sind, wird unter Verwendung der Agarose-Gelelektrophorese eine Gießschale mit einem Kamm zusammengebaut, um Vertiefungen für die Probenbeladung zu schaffen.
Gießen Sie eine geeignete Konzentration geschmolzener Agarose, eines linearen Polysaccharids, gelöst in Elektrophoresepuffer, ergänzt mit einem fluoreszierenden DNA-Farbstoff, auf die Gießschale und lassen Sie es erstarren.
Die geschmolzene Agarose polymerisiert und bildet ein dreidimensionales Gel mit mikroskopisch kleinen Poren.
Geben Sie das gegossene Gel in einen Elektrophoresetank, wobei die Kammseite in der Nähe der negativen Kathode ausgerichtet ist. Der Tank enthält den Elektrophoresepuffer, der bei der Gelherstellung verwendet wird, um eine optimale Leitfähigkeit aufrechtzuerhalten. Den Kamm entfernen.
Übertragen Sie die PCR-Produktprobe, gemischt mit der Ladefarbstofflösung zur Überwachung der Probenmigration, in die Vertiefungen. Beladen Sie eine Vertiefung mit DNA-Leitern definierter Länge. Elektrophorese einleiten.
DNA-Amplikone mit gleichmäßig verteilten negativen
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