Extrazellulärer Vesikelaufnahme-Assay: Eine Methode zur Visualisierung und Quantifizierung der zellulären Aufnahme von extrazellulären Vesikeln mit Hilfe der 3D-Fluoreszenzbildgebungstechnik

Um die zelluläre Kommunikation zu erleichtern, sezernieren Zellen extrazelluläre Vesikel, EVs - nanoskalige Strukturen, die von einer Lipidmembran umgeben sind. EVs transportieren verschiedene biologische Frachten, darunter Makromoleküle und Metaboliten, um sie an die Empfängerzellen zu liefern.

Um die Aufnahme von EV durch Zellen mit Hilfe der konfokalen Mikroskopie sichtbar zu machen, nehmen Sie zunächst frisch isolierte EVs. Diese EVs sind mit Antikörpern vormarkiert, die an eine Fluoreszenzsonde gebunden sind, um sie anschließend leicht sichtbar zu machen.

Geben Sie ein ausreichendes Volumen fluoreszenzmarkierter EVs in eine adhärente Empfängerzellkultur. Inkubieren Sie für den gewünschten Zeitraum. Während der Inkubation heftet sich eine Teilpopulation der markierten EVs oberflächlich an die Zelloberfläche, während andere EVs internalisiert werden.

Fügen Sie einen anderen Fluoreszenzfarbstoff hinzu, um das Zytoplasma der Zelle zu markieren und so internalisierte EVs von denen zu unterscheiden, die an der Empfängerzelle haften. Platzieren Sie die Küvetten unter einem konfokalen Mikroskop und bilden Sie Bilder in verschiedenen Fokusebenen entlang der z-Achse ab, wobei Sie eine R