JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 5:13 Min. • July 8th, 2025
Um Liganden-Analyt-Wechselwirkungen mit Hilfe der Biolayer-Interferometrie (BLI) zu erkennen, beginnen Sie mit einem hydratisierten faseroptischen Biosensor, der auf einer BLI-Instrumentenhalterung befestigt und auf das gewünschte Programm eingestellt ist.
Die Biosensorspitze ist mit einer biokompatiblen Schicht beschichtet, die mit Nickel-Nitriotriessigsäure, Ni-NTA-Gruppen, immobilisiert ist. Tauchen Sie die Spitze des Biosensors in Puffer.
Das Instrument sendet weißes Licht in Richtung des Biosensors, das von zwei Grenzflächen reflektiert wird: der internen Referenz- oder optischen Schicht und der biokompatiblen Schicht. Die reflektierten Strahlen interferieren konstruktiv oder destruktiv bei unterschiedlichen Lichtwellenlängen. Ein Photodetektor detektiert das resultierende Interferenzmuster.
Nach der interferometrischen Basisreaktionsmessung fügen Sie eine Histidin-markierte Ligandenlösung hinzu. Histidin-Tags binden an Nickelkationen auf dem Biosensor und immobilisieren Liganden an der Spitze.
Nach der Assoziation wird das emittierte weiße Licht von der optischen Schicht reflektiert und die biokompatible Schicht mit Liganden mit erhöhter optischer Dicke an der Spitze immobili
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