Quantifizierung der Membrankräuselbildung mittels Rasterelektronenmikroskopie

Externe Stimulatoren aktivieren Zellen und induzieren eine dreidimensionale zirkuläre Membranvorwölbung oder Membrankräuselbildung, die für verschiedene zelluläre Aktivitäten unerlässlich ist.

Um die Bildung von Membrankräuseln zu visualisieren, beginnen Sie mit einer Multi-Well-Platte, die an der Basis ein Deckglas enthält. Auf der Oberseite des Deckglases befinden sich kultivierte Makrophagen.

Behandeln Sie diese Makrophagen mit Stimulatormolekülen, die die Zellen aktivieren und die Reorganisation des Zytoskeletts und die Bildung von Membranvorsprüngen erleichtern. Überlagern Sie die Zellen mit einer Fixierlösung, vernetzen Sie die Proteine und bewahren Sie die Zellstruktur.

Behandeln Sie die fixierten Makrophagen mit steigenden Alkoholkonzentrationen für eine vollständige Dehydratisierung. Trocknen Sie diese Makrophagen mit einem Trockner an kritischen Punkten aus und entfernen Sie alle Spuren von Wasser für eine bessere Bildgebung.

Befestigen Sie das Deckglas mit leitfähigem Klebeband auf einem Rasterelektronenmikroskopie-Probenhalter (REM). Sputtern überziehen das Makrophagen-haltige Deckglas mit einer dünnen Metallschicht, die eine gute elektronische Leitfähigkeit während der