Flotationsbasierte T-Zell-Isolierung mittels Auftriebs-aktivierter Zellsortierung

Um T-Zellen – weiße Blutkörperchen, die für das Immunsystem unerlässlich sind – mit Hilfe der auftriebsaktivierten Zellsortierung (BACS) zu isolieren, wird eine Suspension von mononukleären Zellen des peripheren Blutes, PBMCs, eingenommen. PBMCs enthalten Ziel-T-Zellen und Nicht-Zielzellen wie B-Zellen, Monozyten, natürliche Killerzellen und dendritische Zellen.

Fügen Sie einen Puffer hinzu, der eine ausreichende Menge biotinylierter Anti-CD3-Antikörper enthält, und inkubieren Sie für die erforderliche Dauer. Der Antikörper bindet an den CD3-Komplex – einen multimeren Proteinkomplex auf der Zelloberfläche – ein charakteristisches Merkmal von T-Zellen.

Fügen Sie funktionalisierte Mikrobläschen hinzu – kleine kugelförmige Partikel, die mit Streptavidin beschichtet sind – für eine positive Selektion von Antikörper-gebundenen T-Zellen. Der Kern jeder Mikroblase ist eine Hohlkugel, was sie zu Partikeln mit geringer Dichte macht, die in einer wässrigen Lösung schwimmen können.

Inkubieren Sie die Mischung unter Rühren, damit sich die Mikrobläschen und die Probe gründlich vermischen können. Während der Inkubation bindet Streptavidin auf der Mikroblase an Biotin auf dem T-Zell-gebundenen An