Visualisierung der Caspase-Aktivierung in humanen Monozyten-abgeleiteten Makrophagen

In Immunzellen ist Caspase-1, eine entzündliche Caspase, eine wichtige immunresponsive Komponente, die in inaktiver Form vorliegt. Diese inaktiven Formen bestehen aus einer Pro-Domäne, die mit einer katalytischen Domäne fusioniert ist, und werden durch Proximity-induzierte Dimerisierung aktiv.

Um die Caspase-Aktivierung in vivo sichtbar zu machen, beginnen Sie mit einer Kultur von transfizierten humanen Monozyten-abgeleiteten Makrophagen, die rot fluoreszierende Proteine exprimieren, und einem Paar fluoreszierender Komplementationsreporterproteine. Die Reporterproteine enthalten eine Pro-Domäne von Caspase-1, die mit nicht-fluoreszierenden Fragmenten des Venusproteins fusioniert ist, entweder Venus-N oder Venus-C.

Behandeln Sie die Zellen mit einem bildgebenden Medium, das Lipopolysaccharide – ein aus Bakterien gewonnenes Entzündungsstimulans – und Kaliumionophore – Nigericin – enthält.

Lipopolysaccharide interagieren mit Mustererkennungsrezeptoren auf dem Makrophagen und initiieren so den Aufbau eines Inflammasom-Komplexes.

Nigericin-Moleküle dringen in die Zelle ein und binden an Kaliumionen, wodurch deren Ausfluss in das extrazelluläre Medium bewirkt und die intrazelluläre Kaliu