Quantifizierung der Helicobacter pylori-Last in einem infizierten Mausmagen

Um die Besiedlung von Helicobacter pylori in einem infizierten Mäusemagen zu quantifizieren, beginnen Sie mit dem abgeflachten Magengewebe, das die Körper- und Antrumregion enthält und in Nährmedien suspendiert ist, um die Lebensfähigkeit der Bakterien zu unterstützen.

Homogenisieren, um das Magengewebe mit der Schleimschicht abzubauen, wobei Helicobacter pylori aus dem Gewebe in das Medium freigesetzt wird. Führen Sie serielle Verdünnungen des resultierenden Magenhomogenats mit Medien durch.

Erhalten Sie getrocknete Pferdeblutagar, HBA, Platten, die in mehrere Segmente unterteilt sind. Die HBA-Platten werden mit einer Mischung aus Antibiotika ergänzt. Jede Homogenatverdünnung auf separate Segmente der Platte übertragen und gleichmäßig verteilen.

Positionieren Sie die Platten nach dem Trocknen in einer umgekehrten Position in einem befeuchteten anaeroben Kulturgefäß mit speziellen Gasgemischen. Ausbrüten.

Die mikroaerophile Umgebung, die durch das anaerobe Kulturglas in Verbindung mit den HBA-Nährstoffen bereitgestellt wird, erleichtert das Wachstum und die Bildung von Kolonien von Helicobacter pylori. Die Antibiotika in HBA hemmen das Wachstum von Bakterienarten aus der endogenen Magenmikrobiota.

Zählen Sie Helicobacter pylori-Kolonien auf HBA-Plattensegmenten, die in einen bestimmten zählbaren Bereich fallen.

Berechnen Sie die Helicobacter pylori-Last im Magengewebe, die das Ausmaß der bakteriellen Besiedlung im Gewebe angibt.

Um die Anzahl der lebensfähigen H. pylori im Magen nach der Infektion zu zählen, homogenisieren Sie die in BHI gelagerten Magenproben und führen Sie doppelte serielle Verdünnungen der resultierenden Magenhomogenate in frischer steriler Brühe durch.

Sie vorgetrocknete Pferdeblut-Agar- oder HBA-Platten, die mit zusätzlichen Antibiotika ergänzt werden, in drei oder vier Segmente auf und fügen Sie unter Verwendung einer Anpassung der Miles- und Misra-Technik 10 bis 100 Mikroliter jeder Magenhomogenat-Verdünnung auf ein Segment jeder Agarplatte hinzu. Verteilen Sie die Homogenate mit sterilen Kunststoffschlaufen und lassen Sie die Platten trocknen. Stellen Sie dann die Platten in eine umgekehrte Position in anaerobe Gasgefäße, die eine Petrischalen mit Wasser und ein Gaspaket enthalten, und inkubieren Sie die Gläser vier bis sieben Tage lang bei 37 Grad Celsius.

Wenn Kolonien beobachtet werden können, zählen Sie die Segmente auf, die zwischen 10 und 100 isolierte Kolonien enthalten.