Die Photokonversionstechnik zur Erforschung der Dynamik von Entzündungszellen in Insektenpuppen
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 3:44 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einer Schale mit Glasboden, die transgene Drosophila-Puppen enthält, die markiertes verwundetes Epithel tragen, deren Zelloberflächenproteine grüne Fluoreszenz aufweisen.
Die Immunzellen der Puppen – oder Hämozyten – exprimieren photokonvertierbare grüne Fluorophore im Zytoplasma und rot fluoreszierende Proteine im Zellkern, was die Zellverfolgung erleichtert.
Die verwundeten Zellen setzen Chemolockstoffe – oder Entzündungsmoleküle – frei, die die Hämozyten an die verwundete Stelle locken.
Die konfokale Mikroskopie zeigt den verwundeten Bereich, der von grünen Epithelzellen umgeben ist.
Während der Heilung verlängern grüne Hämozyten mit roten Kernen in der Nähe der Wunde die Membranvorsprünge – Filopodien und Lamellipodien – und wandern in Richtung des verwundeten Bereichs.
Im Laufe der Zeit, wenn der Chemolockstoff diffundiert, wandern entfernte Hämozyten in Richtung Wunde und erzeugen eine Immunzellwelle.
Beleuchten Sie die Subpopulation der wandernden Hämozyten mit einer Wellenlänge von 405 Nanometern. Dadurch wird das photokonvertierbare Fluorophor der Hämozyten irreversibel von grün nach rot umgewandelt.
Diese photokonvertierten Hämozyten reparieren das verwun
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