Quantitative durchflusszytometrische Messung der Pilzsporen-Phagozytose durch humane Phagozyten

Nehmen Sie eine Multiwell-Platte, die eine humane Leukozytensuspension enthält. Fügen Sie FITC-markierte pathogene Pilzsporen hinzu.

Während der Inkubation schwellen die Sporen auf und brechen ihre starre hydrophobe Proteinschicht auf, wodurch die Zellwandpolysaccharide freigelegt werden, die von spezifischen Mustererkennungsrezeptoren auf phagozytischen Zellen erkannt werden.

Diese Bindung löst intrazelluläre Signalwege aus, die zu einer Aktin-Umlagerung und Sporeninternalisierung in Phagosomen führen.

Je nach Aktivierungszustand der Fresszellen bleiben einige Sporen ohne Internalisierung an den Zellen haften.

Ernten Sie die Zellen nach der Inkubation und überführen Sie sie in ein frisches Röhrchen.

Zentrifuge. Resuspendieren Sie die Zellen in einem Puffer und überführen Sie sie auf eine Multi-Well-V-Bodenplatte.

Führen Sie fluorophormarkierte Anti-FITC-Antikörper ein, die an die exponierten FITC-Moleküle auf anhaftenden Sporen binden und diese gegenfärben.

Zentrifuge. Resuspendieren Sie die Zellen in einem Puffer und überführen Sie sie in Durchflusszytometerröhrchen.

Führen Sie eine Durchflusszytometrie durch, um zwischen internalisierten und zelladhärenten Sporen zu unterscheide