Quantitativer Multiplex-Bakteriennachweis mit Farbstoff-markierten magnetischen Mikrosphären

Nehmen Sie eine Assay-Platte, die eine Mischung aus magnetischen Polystyrol-Mikrokügelchen enthält, die intern mit spektral unterschiedlichen Fluorophoren gefärbt sind.

Jedes Mikrosphären-Set ist kovalent an unterschiedliche pathogene bakterienspezifische Fängerantikörper gekoppelt.

Fügen Sie eine hitzeabgetötete pathogene Bakterienmischung hinzu. Ausbrüten.

Capture-Antikörper binden die bakteriellen Zielantigene und bilden Mikrosphären-Bakterien-Komplexe.

Verwenden Sie einen Magnetabscheider, um Komplexe abzusetzen. Ungebundene Bakterien entsorgen und mit Puffer waschen.

Fügen Sie Puffer und biotinylierte Nachweisantikörper hinzu, die spezifisch an mikrosphärengebundene Bakterien binden

.

Trennen Sie die Komplexe magnetisch und waschen Sie sie mit Puffer.

Suspendieren Sie die Komplexe im Puffer. Pipettieren Sie Reportermoleküle, die Fluorophor-gekoppeltes Streptavidin umfassen und an die biotinylierten Nachweisantikörper binden.

Trennen und waschen Sie die Komplexe magnetisch. Im Puffer resuspendieren.

Bei der flussbasierten Analyse regt der erste Laser die internen Fluorophore der Mikrosphäre an, wodurch einzigartige spektrale Signaturen erzeugt und einzigartige Mikrosphärensätze