JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 4:50 Min. • January 15th, 2026
Beginnen Sie mit einem Röhrchen mit Neutrophilen. Fügen Sie einen Puffer hinzu, der einen Proteinase-Inhibitor enthält, um den Proteinabbau zu verhindern.
Fügen Sie ein geeignetes Reinigungsmittel hinzu, um die Neutrophilenmembran zu permeabilisieren
In einem Eisbad beschallen Sie die Probe mit hochfrequenten Schallwellen, um die Zellmembran zu durchbrechen und intrazelluläre Inhalte, einschließlich verschiedener Proteine, freizusetzen.
Kurz zentrifugieren, um den Inhalt von den Röhrchenwänden aufzufangen und in ein geeignetes Röhrchen zu überführen.
Führen Sie ein Reduktionsmittel ein und inkubieren Sie es bei hoher Temperatur, um die Spaltung der Disulfidbindung zu fördern, wodurch die Proteine denaturieren.
Abkühlen lassen und ein alkylierendes Reagenz einführen, das die Sulfhydrylgruppen alkyliert.
Fügen Sie kaltes Aceton hinzu, um die Proteinfällung zu induzieren.
Zentrifuge, um die Proteine und Zellfragmente zu pelletieren. Entfernen Sie den Überstand und trocknen Sie ihn an der Luft.
Geben Sie einen denaturierungsmittelhaltigen Puffer ein und beschallen Sie, um das Proteinpellet wieder aufzulösen.
Zum Schluss fügst du eine Proteasemischung hinzu, die Proteine spaltet. Bewahr
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