JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 4:51 Min. • July 8th, 2025
Schneiden Sie eine Mausrinde in kleine Stücke und geben Sie sie in ein kaltes Seziermedium, das eine gepufferte Salzlösung enthält.
Fügen Sie Verdauungsenzyme hinzu, um die extrazelluläre Matrix zu dissoziieren.
Um Enzymreste zu entfernen, waschen Sie es mit dem Kaltpräpariermedium.
Ersetzen Sie dieses Medium durch ein Medium zur Anreicherung von Astrozyten.
Verwenden Sie anschließend eine Pipette, um die Gewebestücke zu dissoziieren.
Die Suspension durch ein Sieb passieren, um undissoziiertes Gewebe zu entfernen und einzelne Zellen zu erhalten.
Übertragen Sie die Zellen auf eine positiv geladene, polymerbeschichtete Platte. Durch Schütteln inkubieren.
Die Astrozyten haften fest, während sich die locker gebundenen Neuronen, Mikroglia und Oligodendrozyten ablösen.
Das Anreicherungsmedium wandelt reife Astrozyten in sich teilende polygonale Astrozyten um.
Entfernen Sie die abgelösten Zellen und waschen Sie die Astrozyten mit einem Phosphatpuffer.
Fügen Sie Verdauungsenzyme hinzu, um Astrozyten abzulösen.
Fügen Sie ein serumhaltiges Medium hinzu, um die enzymatische Aktivität zu stoppen. Sammeln Sie die Astrozyten in einem Röhrchen und zentrifugieren Sie.
Entsorgen Sie den Überstand.
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