Erzeugung und Pflege von Astrosphären mit humanen pluripotenten Stammzellen

Beginnen Sie mit einer EZM-beschichteten Platte und Keimclustern von humanen pluripotenten Stammzellen in einem Wachstumsmedium, das Rho-Kinase-Inhibitoren enthält.

Die EZM verbessert die Zelladhäsion, während die Inhibitoren die Rho-Kinasen blockieren, den apoptotischen Zelltod verhindern und das Überleben und die Proliferation der Zellen fördern.

Einführung eines neuronalen Differenzierungsmediums, um die Differenzierung von Stammzellen in neurale Vorläuferzellen zu induzieren.

Mit einer Ablöselösung behandeln; die Enzyme in dieser Lösung bauen die EZM und den Zellkontakt ab und geben die Zellen frei.

Sie werden in einen unbeschichteten Kolben überführt, der Rho-Kinase-Inhibitoren enthält.

Die Inhibitoren erleichtern das Überleben der Zellen und die spontane Aggregation zu dreidimensionalen Strukturen oder Sphäroiden.

Ergänzen Sie die Sphäroide mit einem wachstumsfaktorreichen neuronalen Differenzierungsmedium, das es neuralen Vorläuferzellen ermöglicht, sich in Astrozyten-Vorläuferzellen zu differenzieren und Astrosphären zu bilden.

Fügen Sie regelmäßig eine Ablösungslösung hinzu, um die Astrosphären in kleinere Cluster zu zerlegen. Dadurch können Nährstoffe in die inneren Zelle