Differenzierung humaner pluripotenter Stammzellen in Neuronen mit gentechnisch veränderten Lentiviren

Behandeln Sie die adhärenten humanen pluripotenten Stammzellen mit gentechnisch veränderten Lentiviren in einem Transfektionsreagenz.

Das Virus trägt Gene für Antibiotikaresistenz und den neurogenen Transkriptionsfaktor, der von den Tetracyclin-responsiven und regulatorischen Elementen gesteuert wird.

Das positiv geladene Transfektionsreagenz verbessert die virale Fusion und die Freisetzung ihres Inhalts.

Virale RNA transkribiert rückwärts in die DNA und integriert sich in die DNA der Stammzellen, wodurch die Expression regulatorischer Elemente ermöglicht wird, die Aktivatorproteine produzieren.

Fügen Sie ein Basalmedium mit Tetracyclinderivat hinzu, das mit den Aktivatorproteinen einen Komplex bildet.

Dieser Komplex bindet an das Tetracyclin-responsive Element, fördert die Genexpression und produziert die neurogenen Transkriptionsfaktoren, die die Differenzierung von Stammzellen in Neuronen induzieren.

Fügen Sie ein Basalmedium mit einem Antibiotikum hinzu, um die nicht transfizierten Zellen zu eliminieren.

Behandeln Sie die Zellen mit einer Ablöselösung, die proteolytische Enzyme enthält, die die extrazelluläre Matrix oder EZM abbauen und die Zellen freigeben.

Entfernen Sie die E