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DOI: 10.3791/4335-v
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Protokolle für die neuronale Differenzierung von pluripotenten menschlichen Stammzellen (hPSCs) sind oft zeitaufwendig und erfordern erhebliche Zellkultur Fähigkeiten. Hier haben wir ein kleines Molekül-basierte Differenzierung Verfahren zu einem multititre Plattenformat angepasst, die eine einfache, schnelle und effiziente Erzeugung von menschlichen Nervenzellen in einer kontrollierten Art und Weise.
Das übergeordnete Ziel des folgenden Experiments ist es, humane pluripotente Stammzellen oder H-PSCs unter Verwendung eines Multi-Titer-Plattenformats in Neuronen zu differenzieren. Dies wird durch die Ernte und Beschichtung einer einzelligen Suspension von H-PSCs in den V-Boden 96 erreicht. Well-Platten, um über Nacht Embryokörper oder EBS zu bilden.
Als nächstes werden die EBS in U-förmige ultra-niedrige Attachment-Platten überführt, die ein Differenzierungsmedium enthalten, um die Neuroektodermbildung zu induzieren. Anschließend werden die EBS auf mit Matrigel beschichtete Schalen plattiert, um das Wachstum von Neuronen zu fördern. Es können Ergebnisse erzielt werden, die das Vorhandensein typischer neuronaler Marker um den achten Tag herum durch Immunfluoreszenz zeigen.
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