Quantifizierung der Verteilung eines präsynaptischen Proteins im Gehirn von Mäusen mittels Immunfluoreszenz

Nehmen Sie ein chemisch fixiertes Maushirnstück, das in ein gewebeeinbettendes Medium eingebettet ist.

Waschen Sie die Scheibe mit Puffer, um das Medium zu entfernen.

Fügen Sie eine Lösung hinzu, die die Membranen permeabilisiert und unspezifische Bindungsstellen blockiert.

Entfernen Sie die Lösung.

Um neuronale synaptische Proteine sichtbar zu machen, inkubieren Sie die Scheibe mit primären Antikörpern.

Diese Antikörper zielen auf ein präsynaptisches Protein ab, das in den Synapsen bestimmter Hirnregionen exprimiert wird, und ein ubiquitär exprimiertes synaptisches Protein als Referenzmarker.

Mit Puffer waschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen.

Einführung von Fluorophor-markierten Sekundärantikörpern, die auf die Primärantikörper abzielen.

Mit Puffer waschen, um ungebundene Sekundärantikörper zu entfernen.

Gegenfärbung der Zellkerne mit einem DNA-bindenden Farbstoff.

Mit Puffer waschen und die Scheibe mit einem geeigneten Eindeckmedium aufsetzen.

Visualisieren Sie die Scheibe unter einem konfokalen Mikroskop.

Berechnen Sie die mittleren Fluoreszenzintensitätsverhältnisse des Zielproteins und des Referenzmarkers, um die Verteilung des Zielproteins über verschiedene Gehirnreg