JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 5:09 Min. • April 28th, 2025
Platzieren Sie eine Hippocampus-Scheibe aus einem Mäusegehirn in eine Vertiefung, die einen Puffer enthält. Die Scheibe enthält ein Netzwerk von Neuronen, die über Synapsen kommunizieren.
Präsynaptische Neuronenterminals enthalten Neurotransmitter-gefüllte Vesikel mit charakteristischen Transmembrantransportern, während postsynaptische Terminals charakteristische Gerüstproteine aufweisen, die Neurotransmitterrezeptoren regulieren. Beide dienen als Schlüsselmarker für synaptische Strukturen.
Den Puffer durch eine Permeabilisierungs-blockierende Lösung ersetzen und unter Rühren inkubieren, um die Zellmembranen zu permeabilisieren und unspezifische Bindungsstellen zu blockieren.
Primäre Antikörper hinzufügen, die auf die präsynaptischen und postsynaptischen Marker abzielen, und unter Rühren inkubieren, um eine Bindung zu ermöglichen.
Die Scheibe waschen, fluorophor-konjugierte Sekundärantikörper hinzufügen, die für die primären Antikörper spezifisch sind, und unter Rühren im Dunkeln inkubieren.
Waschen Sie die Scheibe und montieren Sie sie dann auf eine Folie.
Identifizieren Sie mit einem konfokalen Mikroskop den interessierenden Bereich und vergrößern Sie, um Synapsen sichtbar zu machen.
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