Etablierung eines Alzheimer-Rattenmodells durch eine Amyloid-Beta-Peptid-Injektion

Beginnen wir mit einer bewegungsunfähigen, betäubten Ratte, deren Schädel freigelegt ist.

Lokalisieren Sie das Bregma, markieren Sie drei Referenzpunkte und bohren Sie die Löcher vorsichtig. Reinigen Sie den Bereich.

Injizieren Sie durch eines der Löcher einen Wachstumsfaktor in den anterodorsalen Thalamuskern in der Nähe des Hippocampus.

Befestigen Sie zwei Schrauben in zwei der Löcher, setzen Sie eine Führungskanüle in das dritte Loch ein und fixieren Sie diese mit Zahnzement. Decken Sie die Führungskanüle mit einer Dummy-Kanüle ab.

Führen Sie am nächsten Tag die Innenkanüle in die Führungskanüle ein und verbinden Sie diese mit dem Injektionssystem.

Injizieren Sie regelmäßig Amyloid-Beta-Peptide und Aluminiumtrichlorid in den Seitenventrikel des Gehirns, um deren Diffusion im Hippocampus zu erleichtern.

Entfernen Sie später das Kanülenimplantationssystem. Desinfizieren Sie den Bereich, füllen Sie die Löcher mit Knochenzement und vernähen Sie den Schnitt.

Im Laufe der Zeit aggregieren die Amyloid-Beta-Peptide zu toxischen Plaques.

Der injizierte Wachstumsfaktor und Aluminiumtrichlorid fördern auch die Plaquebildung um die Hippocampus-Neuronen, die für das Gedächtnis entscheidend sind.

Dies führt zum neuronalen Tod, was zu Gedächtnisstörungen führt, die der Alzheimer-Krankheit ähneln.

Beginnen Sie bei einer narkotisierten Ratte damit, das Fell am Scheitel des Kopfes mit einer chirurgischen Schere abzuschneiden und mit einem Jodophor zu desinfizieren.

Als nächstes machen Sie einen Schnitt an der Kopfhaut entlang der mittleren Längsschädelbahn mit chirurgischen Bistouries und Scheren.

Trennen Sie das Unterhautgewebe und die Faszien. Wischen Sie den Schädelschädelschädel mit 0,3 % Wasserstoffperoxid ab und markieren Sie das Bregma mit einem Filzstift. Als nächstes werden drei Punkte markiert: der anterodorsale Thalamuskern für die Injektion von RHTGF-β1 und die Befestigung einer Schraube, der laterale Ventrikel oder LV-Bereich für die Injektion von Aβ25-35 und AICI3 und schließlich die zweite Befestigungsstelle für die Schraube.

Bohren Sie vorsichtig mit einem flexiblen Knochenbohrer drei Löcher mit einem Durchmesser von 1 Millimeter an den drei markierten Stellen am Schädel. Stoppen Sie die Blutung und reinigen Sie die Schädeloberfläche wiederholt mit steriler, trockener Baumwolle.

Führen Sie anschließend eine Nadel, die mit der Mikroinjektionspumpe verbunden ist, in 4,2 Millimeter Tiefe in das Gehirn ein und injizieren Sie vorsichtig 1 Mikroliter RHTGF-β1 in den Anzeigenbereich. Bewahren Sie die Mikroinjektion zwei Minuten nach der Injektion auf und ziehen Sie sie dann langsam heraus.

Befestigen Sie die beiden Schrauben mit einem kleinen Schraubendreher im Schädel, die in den zuvor markierten Punkten gekennzeichnet sind. Nach dem Einsetzen der Verschraubung montieren Sie das Kanülenimplantationssystem, indem Sie nach der Desinfektion mit 75 % Alkohol für 24 Stunden zuerst die Dummy-Kanüle in die Führungskanüle einführen. Führen Sie dann die Führungskanüle aus Edelstahlrohr in einem Abstand von 4,6 Millimetern durch das Schädelloch in den LV-Bereich durch das Schädelloch ein, mit Hilfe eines Kanülenhalters am stereotaktischen Apparat der Ratte.

Mischen Sie anschließend das Prothesenbasismaterial mit Prothesenbasiswasser in einem Verhältnis von 1,5 Gramm pro 1 Milliliter. Geben Sie die Paste auf die Führungskanüle, den Kunststoffsockel und zwei Schrauben zur Ruhigstellung der Führungskanüle. Decken Sie den gesamten Hautschnitt ab, um Hautinfektionen zu vermeiden.

Ziehen Sie am nächsten Tag die Dummy-Kanüle heraus und führen Sie die Innenkanüle in die Führungskanüle ein. Schrauben Sie die Fixierschraube fest, um die Innenkanüle zu fixieren.

Stellen Sie das Polyethylenrohr ein, das die Mikroinjektionspumpe mit der internen Kanüle verbindet, und regulieren Sie die Injektionsgeschwindigkeit auf 1 Mikroliter pro Minute. Mikroinjizieren Sie das Aβ25-35 in das LV. Warten Sie fünf Minuten nach Beendigung der Injektion und ziehen Sie die innere Kanüle vorsichtig heraus. Führen Sie dann die Dummy-Kanüle wieder in die Führungskanüle ein.

Am 15. Tag, nach der Operation, demontieren Sie das Kanülenimplantationssystem, indem Sie das Grundmaterial der Prothese mit einer chirurgischen Schere und Pinzette entfernen und die Wunde mit einem Jodophor desinfizieren.

Zum Schluss füllen Sie das Loch des Schädels mit Knochenzement und nähen die Haut mit einer einfachen unterbrochenen Nahtmethode.