Messung der Proteasomaktivität in verschiedenen subzellulären Kompartimenten des Rattengehirns
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Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 4:10 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit subzellulären nukleären und synaptischen Fraktionen, die aus der lateralen Amygdala des Gehirns von Kontroll- und angstkonditionierten Ratten entnommen werden.
Jede subzelluläre Fraktion enthält unterschiedliche Konzentrationen von 20S-Proteasomen, dem katalytischen Kern des Proteasom-Komplexes, der für den Abbau unerwünschter zellulärer Proteine verantwortlich ist.
Geben Sie einen Assay-Puffer mit ATP und einem fluorogenen Peptidsubstrat zu den Proben und inkubieren Sie.
In Gegenwart von ATP spaltet das Proteasom das fluorogene Peptid und setzt freie fluorogene Moleküle frei.
Messen Sie mit einem Plattenleser die Fluoreszenzintensität in regelmäßigen Abständen.
Quantifizieren Sie die Fluoreszenz, indem Sie sie mit bekannten Standardkonzentrationen des fluorogenen Moleküls vergleichen.
Die Fluoreszenzintensität ist proportional zur Proteasomaktivität in der Probe.
Eine erhöhte Proteasomaktivität in der Kernfraktion von angstkonditionierten Ratten deutet auf Veränderungen in der gedächtnisbezogenen Genexpression hin, während eine verminderte Aktivität in der synaptischen Fraktion auf Veränderungen in der synaptischen Proteinexpression hinweist, die für die Aufrechte
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