Was ist die Bedeutung des mitochondrialen Transfers in GSCs?

Mitochondrientransfer kann den GSC-Stoffwechsel beeinflussen und möglicherweise die Krebsprogression beeinflussen.

Wie werden Mitochondrien für die Verfolgung markiert?

Mitochondrien werden mit fluoreszierenden Farbstoffen markiert, um ihren Transfer und ihre Internalisierung zu visualisieren.

Welche Techniken werden zur Analyse des mitochondrialen Transfers verwendet?

Konfokalmikroskopie und FACS-Analyse werden eingesetzt, um den mitochondrialen Transfer zu bestätigen.

Welche Rolle spielen GSCs beim Hirnkrebs?

GSCs sind am Tumorwachstum und der Resistenz gegen Therapien bei Hirnkrebs beteiligt.

Kann diese Methode auf andere Zelltypen angewendet werden?

Obwohl sich diese Studie auf GSCs konzentriert, kann die Methode möglicherweise für ähnliche Studien auf andere Zelltypen übertragen werden.

Zentrifugationsunterstützter mitochondrialer Transfer in Glioblastom-Stammzellen

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

0 views • 2:13 min • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Beginnen Sie mit einem Röhrchen mit tiefroten, fluoreszenzmarkierten Donor-Mitochondrien.

Fügen Sie ein kaltes Proliferationsmedium hinzu, um die Mitochondrien zu dispergieren.

Geben Sie die mitochondriale Lösung in der Nähe des Bodens der Vertiefung ab, die modifizierte Glioblastom-Stammzellen oder GSCs enthält.

Diese modifizierten Hirntumorzellen sind mit einem blau fluoreszierenden Farbstoff markiert und enthalten rot fluoreszierend markierte endogene Mitochondrien.

Die Suspension bedeckt die gesamte Oberfläche der Vertiefung und verteilt die Mitochondrien gleichmäßig.

Zentrifugieren Sie die Kulturplatte, um die Mitochondrien für ihre Interaktion näher an die Zellen zu bringen.

Inkubieren Sie nun die Kulturplatte.

Die Zellmembran bildet große Vesikel, die extrazelluläres Material, einschließlich der Donormitochondrien, umschließen.

Die Zellen internalisieren dann diese Vesikel und geben die Spendermitochondrien in ihr Zytoplasma frei, wodurch möglicherweise der GSC-Stoffwechsel und die GSC-Funktionen verändert werden.

Beobachten Sie die Zellen unter einem konfokalen Mikroskop.

Nach der Bildanalyse bestätigt das Vorhandensein von blauen Blutkörperchen, die grüne Donatormitochondrien zusammen mit roten endogenen Mitochondrien enthalten, den erfolgreichen Mitochondrientransfer.

Um isolierte MSC-Mitochondrien auf GSCs zu übertragen, fügen Sie dem mitochondrialen Pellet 200 Mikroliter vorgekühltes GSC-Proliferationsmedium hinzu. Verdünnen Sie das mitochondriale Präparat in GSC-Proliferationsmedium, um die Zugabe von 20 Mikrolitern mitochondrialer Suspension zu den GSCs konsistent zu ermöglichen.

Fügen Sie dann langsam die Mitochondrien in der Nähe des Bodens der Vertiefung hinzu. Zentrifugieren Sie die Platten bei 1.500 mal G bei 4 Grad Celsius für 15 Minuten. Dann stellen Sie die Kulturen sofort auf 37 Grad Celsius. Führen Sie schließlich die Analyse des Mitochondrientransfers, die FACS-Analyse und die konfokale Bildgebung gemäß dem Textprotokoll durch.