JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 4:14 Min. • May 29th, 2025
Nehmen Sie eine Bildgebungskammer mit immobilisiertem myenterischem Plexusgewebe des Dickdarms, in dem sich ganglionäre Plexus befinden, die aus Netzwerken von enterischen Neuronen und Gliazellen bestehen.
Diese Zellen sind mit einem Kalziumindikator markiert, der bei der Kalziumbindung fluoresziert.
Stellen Sie die Kammer anschließend auf einen Fluoreszenzmikroskoptisch. Perfundieren Sie die Kammer mit einem vorgewärmten Puffer, der Inhibitoren enthält, um Muskelkontraktionen während der Bildgebung zu unterdrücken.
Identifizieren Sie mit einem Mikroskop gesunde Ganglionregionen, die eine gleichmäßige Fluoreszenz aufweisen.
Erfassen Sie Fluoreszenzbilder, um die Ausgangsaktivität zu messen und eine Referenz für den intrazellulären Kalziumspiegel zu erhalten.
Perfusionieren Sie das Gewebe mit einem Rezeptoragonisten, um neuronale Rezeptoren zu aktivieren, was einen intrazellulären Kalziumeinstrom und eine Erhöhung der Fluoreszenzintensität auslöst.
Die neuronale Aktivierung stimuliert indirekt die umgebenden Gliazellen, was zu einem Kalziumeinstrom und einer anschließenden Zunahme der Fluoreszenz führt.
Nehmen Sie Zeitraffer-Fluoreszenzbilder auf, um Änderungen der Fluoreszenzintensität zu
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