JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 6:37 Min. • May 29th, 2025
Befestigen Sie eine anästhesierte Maus mit einem Schädelfenster über ihrem motorischen Kortex auf einem Laufband.
Die Maus exprimiert einen Protein-Kinase-A-Reporter in kortikalen Neuronen.
Positionieren Sie das Laufband unter einem Zwei-Photonen-FLIM-Objektiv.
Füge einen Wassertropfen zwischen dem Objektiv und dem Schädelfenster hinzu.
Lassen Sie die Maus aufwachen und sich an das Laufband gewöhnen.
Lokalisieren Sie mithilfe der Hellfeldbeleuchtung den Bildbereich. Schließen Sie das Mikroskopgehäuse, um externes Licht zu blockieren.
Stellen Sie die Bildgebungsparameter ein, initiieren Sie die Drehung des Laufbands, um die Fortbewegung zu induzieren, und beginnen Sie mit der Bildgebung.
Die erzwungene Fortbewegung aktiviert PKA, das den Reporter phosphoryliert und seine Donor- und Akzeptorfluorophore näher zusammenbringt.
Das Mikroskop steuert einen Infrarotlaser, der den Donor dazu anregt, Energie auf den Akzeptor zu übertragen, wodurch die Fluoreszenzlebensdauer des Donors verkürzt wird.
Wenn die Fortbewegung stoppt, kehren PKA und der Reporter in ihren inaktiven Zustand zurück, wodurch der Energietransfer verringert und die Fluoreszenzlebensdauer des Donors verlängert wird.
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