JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 5:13 Min. • May 29th, 2025
Nehmen Sie eine vorgewärmte Agaroselösung, die eine anästhesierte transgene Zebrafischlarve enthält, die ein fluoreszierendes Protein in spinalen Motoneuronen exprimiert.
Bringen Sie die Larve in eine Glasschale mit einem Agarosering.
Drehen Sie die Larve mit einem Mikroskop auf die Seite. Lassen Sie dann die Agarose sich verfestigen und die Larve immobilisieren.
Fügen Sie einen Puffer mit Anästhetikum hinzu, um die Anästhesie aufrechtzuerhalten.
Stellen Sie die Schale auf den konfokalen Mikroskoptisch und lokalisieren Sie mit Hellfeld-Bildgebung die dorsale Rückenmarksregion.
Wechseln Sie in den Fluoreszenzmodus, um fluoreszierende Motoneuronen zu visualisieren.
Bestimmen Sie die zentrale Z-Ebene des Zellsomas für eine präzise Ablationszielung.
Konfigurieren Sie Bildgebungsparameter für eine hochauflösende Erfassung bei gleichzeitiger Minimierung von Lichtschäden.
Sobald die gewünschte Z-Ebene scharf ist, führen Sie eine Ablation an der Zielneuronenregion mit einem fokussierten ultravioletten Laser durch.
Die Laserenergie stört zelluläre Strukturen, was zu Fluoreszenzverlust und Zelltod führt. Der irreversible Fluoreszenzverlust bestätigt eine präzise Ablation, ohne die umgebenden Zel
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