Mess Protein Stabilität in Wohnzebrafischembryonen unter Einsatz von Fluoreszenz Decay Nach Photokonversion (FDAP)

Das übergeordnete Ziel des folgenden Experiments ist es, die intrazelluläre und extrazelluläre Proteinstabilität in lebenden Zebrafischembryonen zu messen. Dies wird erreicht, indem ein Protein von Interesse mit einem photokonvertierbaren fluoreszierenden Protein markiert wird und indem mRNA, die für die Fusion kodiert, sowie ein Fluoreszenzfarbstoff in Zebrafischembryonen injiziert wird. Als nächstes wird das photokonvertierbare Fusionsprotein photokonvertiert, wodurch das Protein mit einem Impuls markiert wird.

In diesem Beispiel wird das Fusionsprotein sezerniert, dann wird der Zerfall der intra- und extrazellulären photokonvertierten Fluoreszenzintensität über die Zeit überwacht und mit einer exponentiell abnehmenden Funktion ausgestattet, um die intrazellulären und extrazellulären Halbwertszeiten des Fusionsproteins zu bestimmen. Die Ergebnisse zeigen die in vivo Stabilität von photokonvertierbaren Fusionsproteinen, basierend auf dem Zerfall des Fluoreszenzsignals im Laufe der Zeit. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen in der Zell- und Entwicklungsbiologie zu beantworten.