Visualisierung der Migration von Neuralleistenzellen in einem Zebrafischembryo mit Hilfe von Multiphotonen-Zeitraffer-Bildgebung

Beginnen Sie mit einem lebenden, dechorionierten transgenen Zebrafischembryo, der in Agarose mit niedrigem Schmelzpunkt eingebettet und in eine mit Embryomedien gefüllte Kammer gelegt wird.

Der Embryo exprimiert verstärkte, mit grün fluoreszierendem Protein (EGFP) markierte Neuralleistenzellen.

Positionieren Sie die Kammer auf dem Mikroskoptisch. Stellen Sie das Objektiv mit Hellfeldbeleuchtung so ein, dass es den Embryo im Sichtfeld fokussiert und zentriert.

Wechseln Sie zum Wasser-Immersionsobjektiv und konzentrieren Sie sich wieder auf den Embryo.

Passen Sie die Bildgebungsparameter an, um Z-Stapel-Bilder vom lateralen bis zum medialen Rand aufzunehmen und die Breite des Auges zu erfassen.

Schalten Sie die Hellfeldbeleuchtung aus, decken Sie die Bühne ab und starten Sie die Zeitrafferaufnahme.

Füllen Sie die Kammer während der Bildgebung nach Bedarf mit Medien auf.

Unter Laserbeleuchtung fluoreszieren die Neuralleistenzellen.

Visualisieren Sie die Wanderung dieser Zellen aus dem Neuralrohr in die kraniofazialen Regionen, um das sich entwickelnde Auge zu umgeben, um das periokulare Mesenchym und den frontonasalen Prozess zu besiedeln, und ventral, um die Pharynxbögen zu bilden.

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