Entwicklung eines neuronalen Netzwerks mit Mikrogewebe unter Verwendung einer Hydrogel-basierten Mikrosäule

Beginnen Sie mit einer Schale, die eine Mikrosäule enthält. Die Mikrosäule hat eine Hydrogel-Außenhülle und eine extrazelluläre Matrix oder einen EZM-Kern.

Tropfen des Nährmediums in dieselbe Schale geben.

Übertragen Sie die neuronalen Zellaggregate in die Schale und legen Sie sie dann in eines der medialen Tröpfchen.

Beobachten Sie unter einem Stereomikroskop und fügen Sie Zellaggregate an beiden Enden der Mikrosäule ein.

Übertragen Sie dann die ausgesäte Mikrosäule in das Medium, um die Zellviabilität zu gewährleisten.

Inkubieren, um die Zellanheftung an die EZM zu ermöglichen.

Bestätigen Sie mit dem Stereomikroskop die Zelladhäsion. Fügen Sie dann Nährmedium hinzu, um die Schale abzudecken und zu inkubieren.

Die angehängten Neuronen beginnen, ihre Axone durch die EZM zu verlängern.

Ersetzen Sie regelmäßig das halbe Medium durch ein frisches Medium, um den Nährstoffgehalt zu erhalten.

Im Laufe der Zeit wachsen die Axone und erstrecken sich über die gesamte Länge der Mikrosäule und bilden neuronale Netzwerke.

Das entwickelte neuronale Netzwerk ist bereit, die beschädigten neuronalen Schaltkreise zu rekonstruieren.

Fahren Sie unmittelbar nach der Inkubation mit der Zellaussaat fort. Übertragen Sie etwa 10 bis 20 Mikroliter Kulturmedium in zwei freie Bereiche in den Petrischale, in denen sich die Mikrosäulen befinden. Sammeln Sie mit einer Mikropipette die neuronalen Aggregate einzeln und übertragen Sie sie in die Petrischale, in der sich die Konstrukte befinden. Bewegen Sie die Aggregate mit einer Pinzette in einen der kleinen Pools mit Kulturmedium, um die Zellgesundheit zu erhalten.

Verwenden Sie bei der Beobachtung unter einem Stereomikroskop eine Pinzette, um ein Aggregat an einem Ende der Mikrosäulen für unidirektionale Mikro-TENNs oder an jedem Ende für bidirektionale Architektur einzuführen. Bringen Sie dann die ausgesäte Mikrosäule in den anderen kleinen Pool mit Kulturmedium, um eine Austrocknung zu vermeiden und die Gesamtgesundheit zu erhalten. Wenn alle Mikrosäulen beladen sind, inkubieren Sie 45 Minuten lang bei 37 Grad Celsius und 5 % Kohlendioxid, damit die Aggregate an der ECM haften können.

Nach der Inkubation wird mit dem Stereomikroskop überprüft, ob die Aggregate an den Enden der Mikrosäulen verbleiben. Zum Schluss werden die Petrischalen mit den Mikro-TENNs mit einer Pipette vorsichtig mit Kulturmedium geflutet. Stellen Sie die Schalen in einen Inkubator bei 37 Grad Celsius und 5 % Kohlendioxid für die Langzeitkultur.