Chirurgische Verfahren für eine Ratte Modell Teilweise Lebertransplantation mit arteriellen Rekonstruktion

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, eine partielle orthotope Lebertransplantation bei Ratten als reproduzierbares experimentelles Modell für die Transplantationsforschung durchzuführen. Dies wird erreicht, indem zunächst die Leber der Spenderratte erklärt wird. Der zweite Schritt ist die ex vivo Aufbereitung des Lebertransplantats, einschließlich einer 50%igen Leberresektion.

Als nächstes wird die native Leber der Empfängerratte herausgeschnitten. Der letzte Schritt ist die Implantation des Leberteiltransplantats in die Empfängerratte. Letztendlich werden die Alanin- und Aminotransferase-Spiegel im Serum gemessen, um die hepatozelluläre Schädigung des Lebertransplantats nach der Transplantation zu beurteilen.

Im Allgemeinen haben wir bei Personen, die neu in diesem Verfahren sind, Schwierigkeiten wegen der Komplexität, die fortgeschrittene mikrochirurgische Fähigkeiten erfordert. Um mit diesem Verfahren zu beginnen, legen Sie die anästhesierte Spenderratte auf ein Heizkissen, nachdem Sie durch ein Zehenkneifen bestätigt haben, dass das Tier vollständig betäubt ist, und fixieren Sie die Oberarme mit dem magnetischen Fixateur-Retraktionssystem. Rasieren Sie das Fell von der gesamten Bauchpartie der Ratte und sterilisieren Sie die entsprechende Haut mit einer Povidon-Jodlösung.

Öffnen Sie den Bauch durch einen Mittellinienschnitt mit beidseitigen Extensionen. Platzieren Sie eine Fünf-Milliliter-Spritze unter dem Rücken der Ratte, so dass der suprahepatische Venenhöhle ventral mit einer Mückenzange angehoben wird, ziehen Sie den Prozess in Richtung Kopf und legen Sie die subkostalen Retraktoren an, um das Operationsfeld zu öffnen. Aufgrund der Notwendigkeit, die Retraktoren und die Fünf-Milliliter-Spritze während des Eingriffs häufig zu manipulieren, werden keine OP-Abdeckungen um den Schnitt herum verwendet, die unter einem Operationsmikroskop mit 16-facher Vergrößerung arbeiten, das falciforme Band und das linke dreieckige Band wie acht präparieren und die linke Vena phrenicus teilen, den Median und den linken lateralen Lappen mit einem feuchten Mulltausch nach oben zurückziehen.

Mit einer bipolaren Pinzette gerinnen und teilen Sie die paraösophagealen Gefäße zwischen dem linken lateralen und dem vorderen Koordinatenlappen. Bewegen Sie die Eingeweide außerhalb des Bauches auf die linke Seite der Ratte und bedecken Sie sie mit einem feuchten Mulltupfer. Abstrich, ziehen Sie den rechten Seitenlappen mit einem feuchten Tupfer nach oben zurück.

Isolieren Sie die infrahepatische Venenhöhle vom retroperitonealen Gewebe und ligieren Sie die rechte Nebennierenvene, die später kurz vor der Transplantatentnahme geteilt wird, um einen Stent in den Gallengang einzuführen, und ligieren Sie zuerst den Gallengang auf Höhe der Verzweigung der Arteria gastroduodenalis. Machen Sie einen kleinen Schnitt in der Vorderwand des Gallengangs proximal zum ligierten Punkt, und halten Sie dann die Vorderwand des Schnittes mit einer geraden Mikrozange in der linken Hand fest, verwenden Sie eine gebogene Mikrozange in der rechten Hand, um einen Stent in den Kanal einzuführen. Sichern Sie es mit einem Seidenfaden mit sechs Nullen.

Halten Sie eines der abgeschnittenen Enden des Fadens auf einer Länge von vier Millimetern am Gallengang, damit der Faden bei der späteren Anastomose gehalten werden kann. Befreien Sie die Vena poralis von den Vena pori und der Milzvene, indem Sie sie ligieren und teilen, die Arteria gastroduodenalis ligatisieren und teilen. Isolieren Sie dann die Arteria hepatica communis vom Pankreaskopf bis zu ihrer Wurzel.

Drehen Sie die Leber mit Wattestäbchen nach rechts und präparieren Sie das Band um den hinteren Teil der Leber und der Speiseröhre nach Abschluss der Vorbereitungen. Zur Leberexzision. Entfernen Sie die Retraktoren, die Mückenzange für den Xiphoid-Prozess und die Fünf-Milliliter-Spritze unter dem Rücken der Ratte.

Bringen Sie den Darm wieder in die Bauchhöhle zurück. Injizieren Sie 500 IE Heparinnatrium in zwei Milliliter normaler Kochsalzlösung durch die Penisvene. Etwa drei Minuten später setzen Sie die Fünf-Milliliter-Spritze zurück, die Mückenzange und der Retraktor ligieren die Arteria hepatica communis proximal zu ihrer Wurzel.

Halten Sie eines der abgeschnittenen Enden des Fadens für die Arteria hepatica communis ligiert. Lange nach dem Einklemmen des infrahepatischen Venenkavers. In der Nähe der rechten Nierenvene mit einer Mückenzange.

Klemmen Sie die Pfortader mit einer Einweg-Mikrogefäßklemme unter dem Stumpf der Milzvene. Schneiden Sie die Vorderwand der Pfortader an und führen Sie einen 18-Gauge-Katheter in das Portal ein. Die Vene perfundiert die Leber in situ mit 60 Millilitern kalter Histidin-Trytophan-Ketoglutarat-Lösung.

Bei einem hydrostatischen Druck von 20 Zentimetern schnitt Wasser sofort das Zwerchfell, den intrathorakalen Venenschwellkörper und die Vorderwand des infrahepatischen Venenhöhlen auf, um die Perfusionslösung aus der Leber spülen zu können. Klemmen Sie den infrahepatischen Venenhöhlenkaver mit einem Mikrogefäß direkt unter der Leber fest. Schneiden Sie die Leber heraus, indem Sie den infrahepatischen Venenkaver präparieren.

Die Vena poralis, das Zwerchfell, die restlichen Bänder, die rechte Nebennierenvene und die Arteria hepatica communis. Legen Sie die Verbrauchsteuerleber in kalter HTK-Lösung in einen Metallbecher, der in einer Plastikbox mit zerstoßenem Eis oder Org. Eingriffe für die Lebertransplantation werden in einem mit eiskalter HTK-Lösung gefüllten Metallbecher zur Befestigung einer Manschette an der Pfortaderklemmung des portalvenösen Stammes mit einer DeBakey Bulldog-Klemme durchgeführt und die Klemme in einer Überbrückungsposition über der Pfanne platziert.

Legen Sie die Vena porale durch die Manschette und klemmen Sie die Vena al zusammen mit der Verlängerung der Manschette in der 12-Uhr-Position wieder ein, wenden Sie die Wand der Vena porale über die Manschette, um den Stumpf der Milzvene außerhalb der Manschette in der Sieben-Uhr-Position zu positionieren und sichern Sie die Pfortader mit einem Seidenfaden von sechs null, um einen Stent in die Leberarterie einzuführen. Fixieren Sie die Leber, indem Sie beide Ränder des Zwerchfells mit einer Zange festklemmen und die Arteria hepatica communis gerade ziehen, indem Sie den ligierten Faden mit der DeBakey Bulldog-Klemme mit einer geraden Mikroschere festhalten. Machen Sie mit der linken Hand einen kleinen Schnitt in der Vorderwand der Arteria hepatica communis.

Halten Sie die Vorderwand des Schnittes mit einer geraden Mikrozange fest und führen Sie mit der rechten Hand einen Stent in die Arteria hepatica communis ein. Befestigen Sie den Stent mit einer gebogenen Mikrozange mit einem Seidenfaden mit sechs Nullen und halten Sie eines der abgeschnittenen Enden des Fadens auf einer Länge von vier Millimetern. Spülen Sie die Leber durch den arteriellen Katheter mit fünf Millilitern kalter HTK-Lösung für die 50%ige Leberresektion.

Klemmen Sie zuerst den hinteren Koordinatenlappen mit einer Mückenzange fest, um ihn zu fixieren. Dann ligate. Sein Stiel ist mit einem Seidenfaden mit vier Nullen versehen und reseziert den Lappen.

Der vordere Karatlappen wird auf die gleiche Weise entfernt. Drehen Sie anschließend die Plastikbox um 90 Grad. Klemme den rechten Rand des Zwerchfells und den linken Teil des Medianlappens.

Machen Sie einen kleinen Schnitt am oberen Rand des Randes der bilateralen Anteile des Mediallappens und entfernen Sie dann den linken Teil nach der Ligatur. Nach der Ligatur des Pedikels mit einem Vier-Null-Seidenfaden wird der linke Seitenlappen entfernt, die resezierte Leberoberfläche vorsichtig mit einer bipolaren Pinzette kauterisiert. Die Lebermasse ist nun bei der Plastik der suprahepatischen Hohlvene um ca. 50% reduziert.

Fixieren Sie zunächst die Position der Leber, indem Sie beide Ränder des Zwerchfells mit einer Mückenzange festklemmen. Anschließend wird die Vorderwand der suprahepatischen Hohlvene abgeschnitten, indem das entsprechende Zwerchfell entfernt wird. Befestigen Sie 2 7 0 Polypropylen-Nähte von außen an die Innenseite beider Ecken als Haltenähte für die spätere Anastomose.

Danach wird die hintere Wand der suprahepatischen Hohlvene abgeschnitten. Lagern Sie das Lebertransplantat bei vier Grad Celsius in HTK-Lösung in einem kalten Wasserbad. Bereiten Sie den Empfänger auf die Operation auf ähnliche Weise vor wie auf die Spenderoperation und öffnen Sie den Bauch durch einen Mittellinienschnitt.

Legen Sie einen feuchten Tupfer über die rechte Seite des Zwölffingerdarms und den gesamten Darm. Um ein Operationsfeld um den infrahepatischen Bena-Kaver zu erhalten. Setzen Sie den linken lateralen und medianen Lappen in die linke subphrenische Höhle ein und ziehen Sie den rechten lateralen Lappen mit einem feuchten Blickabstrich nach oben zurück.

Isolieren Sie die infrahepatische Hohlvene vom retroperitonealen Gewebelegaten und teilen Sie die rechte Nebennierenvene mit der feuchten Gaze und den Wattestäbchen. Drehen Sie die Leber nach links und präparieren Sie das Band um die Rückseite der Leber. Durchschneiden Sie den Gallengang direkt unter dem Abzweig vom Chordalappen.

Halten Sie eines der abgeschnittenen Enden des Fadens für den vier Millimeter langen Gallengang ligiert und teilen Sie die Arteria gastroduodenalis und die eigentliche Leberarterie in einem Abstand von drei Millimetern zu der Verzweigung von der Arteria hepatica commune, um eine breite Struktur der Arterie zu bilden, am Ende der Arteria hepatica communis klemmen Sie die infrahepatische Venenhöhle mit einem Mikrogefäß aus Metall knapp über der rechten Niere ab Vene und Pfortader auf Höhe ihrer Bifurkation im Leberhilum mit einer Mückenzange klemmen die suprahepatische Hohlvene zusammen mit dem Zwerchfell durch eine periphere Gefäßklemme und fixieren die Klemme in einem Klumpen aus Ton auf Ölbasis. Reduzieren Sie die Anästhesie mit isof-Fluor auf 0,4 Volumenprozent. Die native Leber des Empfängers wird durch Präparation der Hohlvene suphepatisch an der Grenze zwischen der suprahepatischen Hohlvene und der Leber exeziert.

Die Pfortader knapp über dem Kiefer der Mückenzange und die Hohlvene infrahepatisch etwas unterhalb des Mittelpunkts zwischen Leber und rechter Nierenvene. Platzieren Sie das Lebertransplantat orthotopisch. Die Rekonstruktion des Gefäßes ist der schwierigste und wichtigste Teil dieses Eingriffs.

Es muss sehr vorsichtig, aber schnell durchgeführt werden: Für die Anastomose der suprahepatischen Hohlvene durch kontinuierliche Naht. Legen Sie die Stütznaht von innen nach außen auf die suprahepatische Hohlvene des Empfängers, indem Sie das beigefügte Polypropylen mit sieben Nullen in der rechten Ecke des Transplantats verwenden, und binden Sie anschließend auf die gleiche Weise einen Knoten. Platzieren Sie die zweite Haltenaht in der linken Ecke.

Dies ist der Startstich einer Laufnaht. Um die Anastomose zu erweitern, fassen und halten Sie die Nähte mit DeBakey Bulldog-Klemmen an beiden Ecken mit sanftem Zug nach oben. Als nächstes stechen Sie die Naht an der linken Ecke durch die Wand auf der Transplantatseite von außen nach innen dicht an der Knotenaußenseite und nähen die hintere Reihe der Hohlvene Intraluminal mit sieben bis acht Stichen in die rechte Ecke.

Die ersten Stiche vorsichtig machen, so dass die inneren Lumen in der rechten Ecke zueinander liegen. Stechen Sie die sieben Nullen Polypropylen durch das Gefäß auf der Transplantatseite nach außen. Die vordere Reihe von außen von rechts nach links mit ca. 10 Maschen vernähen.

Spülen Sie die Innenseite mit Laktat-Ringerlösung. Um Luftblasen zu entfernen, machen Sie den letzten Stich in der Nähe der Bleinaht und binden Sie sie dann für die Rekonstruktion der Pfortader zusammen, klemmen Sie die Pfortader mit einer Mikrogefäßklemme ein und fixieren Sie die Mückenzange in der Tonerde. Als nächstes schneiden Sie die Vorderwand der Pfortader direkt unter dem Kiefer der Mückenzange ein.

Waschen Sie die Innenseite der Empfängerpfortader und die Manschette mit Laktat-Ringerlösung. Führen Sie die Manschette in die Pfortader ein und befestigen Sie sie mit einem umlaufenden Sechs-Null-Seidenfaden. Zum Schluss die Leber wieder perfundieren.

Entfernen Sie die Fünf-Milliliter-Spritze vom Rücken der Ratte und erhöhen Sie die Konzentration von Isof-Fluor auf 0,8 Volumenprozent für die Rekonstruktion der Leber durch eine Stenttechnik. Halten Sie zuerst den Faden der richtigen Leberarterie mit einer Mückenzange fest und fixieren Sie ihn in der Tonerde. Klemmen Sie dann die gemeinsame Leberarterie des Empfängers ein.

Machen Sie einen kleinen Schnitt in der Bifurkation der Y-Struktur am Ende der Arteria hepatica commune, um eine trichterförmige Öffnung zu erhalten. Halten Sie den Stent, der in der Gelenkarterie communis des Transplantats platziert ist, mit einer gekrümmten Mikrozange fest. Schieben Sie den Stent in die gemeinsame Leberarterie des Empfängers und befestigen Sie ihn mit einem Seidenfaden mit sechs Nullfäden, einem Ende dieses Fadens und dem vier Millimeter langen Faden an der Transplantatarterie communis zusammen, so dass beide Leberarterien näher beieinander rücken und die Spannung der Anastomosenstelle verringert wird.

Danach lösen Sie den Klemmverstärker für die Anastomose des infrahepatischen Venenhöhlenhöhlen durch eine kontinuierliche Nahtanastos auf die gleiche Weise wie für den suprahepatischen Venenhöhlenknochen, verwenden jedoch mehr Stiche mit feineren Bissen. Erhöhen Sie nach dem Dec-Clamping die Anästhesiekonzentration auf 1,0 Volumenprozent für die Rekonstruktion des Gallengangs. Halten Sie den Faden des Empfängergallengangs mit einer Mückenzange fest und fixieren Sie ihn in der Tonerde.

Machen Sie einen kleinen Schnitt in den Gallengang auf der entsprechenden Höhe, damit der rekonstruierte Gallengang nicht zu lang wird. Setzen Sie den Stent ein und befestigen Sie ihn mit einem Seidenfaden mit sechs Nullen. Binden Sie diesen Faden und den Faden an den Transplantatkanal.

Gemeinsam sind nun alle Rekonstruktionsmaßnahmen abgeschlossen. Schließen Sie den Bauchschnitt, indem Sie vier Vicryl-Nähte in Schichten fortlaufen. Unmittelbar nach der Operation behandeln Sie die Empfängerratte mit einer subkutanen Injektion von Spheronatrium und Buprenorphin in insgesamt 1,5 Millilitern normaler Kochsalzlösung.

Lassen Sie die Ratte 60 Minuten lang in einem speziellen Käfig auf der Intensivstation mit warmer Luft und Sauerstoffzufuhr erholen, bevor Sie sie in einen normalen Käfig zurückbringen. Alle Empfängerratten überlebten bis zur geplanten Euthanasie zur Blutentnahme 1, 3, 24 und 168 Stunden nach der portalen Reperfusion. Serumproben wurden auf Alanin-Aminotransferase-Spiegel analysiert, die den Grad der hepatozellulären Schädigung der Lebertransplantate nach der Transplantation widerspiegeln.

Wie in diesem Transplantat gezeigt, erreichte ein LT-Spiegel nach 24 Stunden einen Höhepunkt und sank dann auf den normalen Bereich von 168 Stunden. Nach diesem Video sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie eine partielle thematische Lebertransplantation bei Ratten als reproduzierbares experimentelles Modell für die Transplantationsforschung durchführen können.