Ein hoher Durchsatz MHC II-Bindungsassay für die quantitative Analyse von Peptid-Epitope

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die Bindung von kurzen Peptiden an humane MHC-Immunproteine unter Verwendung eines Hochdurchsatz-Plattenassays mit 3 84 Vertiefungen zu quantifizieren. Dies wird erreicht, indem zunächst Konkurrenzbindungsassays in der Lösungsphase mit den interessierenden Peptiden durchgeführt werden. Im zweiten Schritt werden die äquilibrierten Peptid-MHC-Zwei-Komplexe mit einem anti-MHC-Zwei-Antikörper eingefangen, der auf hochbindenden ELIZA-Platten immobilisiert ist.

Als nächstes werden die gefangenen Komplexe mit dem mit Streptavidin markierten Opium inkubiert und dann wird das ungebundene Streptavidin weggewaschen und das gefangene Opium aktiviert. Letztendlich kann die zeitaufgelöste Fluorometrie verwendet werden, um die Spiegel des eingefangenen MHC-Zwei-Kontrollpeptids zu quantifizieren. Diese Methode kann erste Einblicke in das immunogene Potenzial von Zielproteinen liefern.