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Immunologie
0 Aufrufe • 5:21 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie einen Microarray-Objektträger, der Histonpeptide mit posttranslationalen Ziel- und Nichtzielmodifikationen (PTMs) enthält.
Die Peptide werden über konjugiertes Biotin an bestimmten Stellen auf dem Streptavidin-funktionalisierten Glasobjektträger immobilisiert.
Die Flecken enthalten auch ein immobilisiertes Biotin-konjugiertes grünes Fluorophor, das die Identifizierung der Flecken erleichtert.
Führen Sie einen Blockierungspuffer ein, der eine unspezifische Antikörperinteraktion verhindert.
Entfernen Sie den Puffer und zentrifugieren Sie, um den Objektträger zu trocknen.
Umrande das Array in einem Wachsimprinter mit Wachs.
Äquilibrieren Sie das Array mit einem Hybridisierungspuffer.
Inkubieren Sie mit den primären Antikörpern, die für ein Ziel-PTM spezifisch sind.
Führen Sie rote Fluorophor-konjugierte Sekundärantikörper ein, die an die primären Antikörper binden.
Entfernen Sie die ungebundenen Antikörper und zentrifugieren Sie, um den Objektträger zu trocknen.
Bilde den Objektträger mit einem Microarray-Scanner. Die grüne Fluoreszenz hilft bei der Identifizierung der Flecken, während die rote Fluoreszenz auf eine PTM-Antikörper-Interaktion hinweist, was die Antikörperspez
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