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DOI: 10.3791/51321-v
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This article presents a protocol for generating a native matrix from fibroblasts to study tumor cell invasion. The methodology allows for the assessment of the impact of different stromal cell types on tumor cell biology.
Gewebezüchtungen Fibroblasten-nativen Matrix ist eine aufstrebende Werkzeug, um eine Stroma-Substrat, das epitheliale Zellproliferation und Differenzierung unterstützt generieren. Hier wird ein Protokoll gemäß dieser Methode die Auswirkung verschiedener stromalen Zelltypen auf Tumor Zellbiologie Beurteilung vorgelegt.
Das übergeordnete Ziel des folgenden Verfahrens ist es, eine native Matrix aus Fibroblasten zu generieren, um die Invasion von Tumorzellen zu beurteilen. Dies wird zunächst erreicht, indem Fibroblasten auf Kunststoff in einem mit Sorbinsäure angereicherten Medium gezüchtet werden, um die native Matrix zu erzeugen. Im zweiten Schritt wird die native Matrix von der plastischen Wachstumsoberfläche abgelöst und freigesetzt, und dann wird diese Matrix mit Tumorzellen besiedelt und nach einer festgelegten Zeit an die Luft-Flüssigkeits-Grenzfläche gehoben.
Diese 3D-Kulturen werden für die histologische Analyse der Tumorzellinvasion geerntet. Letztendlich können die Auswirkungen der nativen Fibroblastenmatrix auf die Invasion von Tumorzellen durch immunhistologische Analysen bewertet werden. Der Vorteil dieser Technik zur Erzeugung typischer 3D-Kulturen besteht also darin, dass wir die von den Fibroblasten selbst produzierte native Matrix in Abwesenheit von synthetischen oder fremden Substraten, wie z. B. Kollagen vom Typ 1, beurteilen können. Beginnen Sie mit der Aussaat von 200.000 Fibroblasten pro Vertiefung in sechs Vertiefungsplatten in Faserstrahlmedien, ergänzt mit frisch zubereiteter IC-Säure.
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