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Glycopeptid-Capture für Zelloberflächen Proteomics
Glycopeptid-Capture für Zelloberflächen Proteomics
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JoVE Journal Biology
Glycopeptide Capture for Cell Surface Proteomics

Glycopeptid-Capture für Zelloberflächen Proteomics

Full Text
11,755 Views
10:11 min
May 9, 2014

DOI: 10.3791/51349-v

M. C. Gilbert Lee1, Bingyun Sun1

1Department of Chemistry,Simon Fraser University

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Zelloberflächen-Proteine ​​sind biologisch wichtige und weithin glykosyliert. Wir stellen hier eine Glykopeptid-Capture-Ansatz für einfache LC-MS basierte Proteomanalysen löslich zu machen, zu bereichern, und deglycosylieren diese Proteine.

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist die Anreicherung von Proteinen der Zelloberflächenmembran mit geringer Abundanz. Dies wird erreicht, indem zunächst Membranproteine denaturiert und verdaut werden. Der zweite Schritt besteht darin, die Glykane zu oxidieren und die glykosylierten Peptide auf einer Harzoberfläche einzufangen.

Die Nicht-Glykopeptide werden dann vom Harz abgewaschen. Der letzte Schritt ist die Freisetzung der N-verknüpften Glykopeptide aus dem Harz für die lc-MS-Analyse. Letztendlich kann die identifizierte Peptidsequenz zu Identifizierungs- und Quantifizierungszwecken auf Proteine zurückgeführt werden.

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Molecular Biology Heft 87 Membranprotein N-gebundenen Glykoproteins post-translationale Modifikation Massenspektrometrie HPLC Hydrazid Chemie N-Glycoproteomikstrategie Glycopeptid-Capture

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