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DOI: 10.3791/51349-v
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Zelloberflächen-Proteine sind biologisch wichtige und weithin glykosyliert. Wir stellen hier eine Glykopeptid-Capture-Ansatz für einfache LC-MS basierte Proteomanalysen löslich zu machen, zu bereichern, und deglycosylieren diese Proteine.
Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist die Anreicherung von Proteinen der Zelloberflächenmembran mit geringer Abundanz. Dies wird erreicht, indem zunächst Membranproteine denaturiert und verdaut werden. Der zweite Schritt besteht darin, die Glykane zu oxidieren und die glykosylierten Peptide auf einer Harzoberfläche einzufangen.
Die Nicht-Glykopeptide werden dann vom Harz abgewaschen. Der letzte Schritt ist die Freisetzung der N-verknüpften Glykopeptide aus dem Harz für die lc-MS-Analyse. Letztendlich kann die identifizierte Peptidsequenz zu Identifizierungs- und Quantifizierungszwecken auf Proteine zurückgeführt werden.
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